Bagikan:
Dasar pewarnaan negatif, teknik, kelebihan dan kekurangan
itu pewarnaan negatif Ini adalah metode pewarnaan khusus untuk menyoroti keberadaan kapsul di beberapa mikroorganisme - terutama Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Cryptococcus neoformans-, dari sampel klinis atau kultur murni.
Sampel langsung yang biasa digunakan untuk menerapkan pewarnaan negatif adalah cairan serebrospinal. Teknik ini merupakan alternatif cepat untuk diagnosis dugaan meningitis, khususnya Cryptococcus neoformans.
Demikian juga, noda ini dapat diterapkan pada dahak dan cairan steril pada umumnya, serta pada strain yang diperoleh dari kultur murni muda. Teknik ini menggunakan tinta nigrosine atau Cina untuk pelaksanaannya; oleh karena itu, ini adalah metodologi yang sangat sederhana dan ekonomis untuk diterapkan yang menyediakan informasi dengan nilai diagnostik yang hebat dalam waktu singkat.
Dalam pengertian ini, laboratorium mana pun dapat melakukan pewarnaan ini. Tentu saja, laboratorium harus memiliki staf yang kompeten, yang mampu mengenali ragi Cryptococcus neoformans terisolasi atau pemula dan membedakannya dari leukosit dan artefak yang mungkin ada dalam sampel.
Indeks
- 1 Yayasan
- 2 Teknik
- 2.1 Bahan
- 2.2 Spesifikasi untuk pengambilan sampel
- 2.3 Eksekusi teknik dengan sampel langsung
- 2.4 Eksekusi teknik dengan strain dari budaya
- 2.5 Pengamatan dalam mikroskop
- 3 Keuntungan
- 4 Kerugian
- 5 Pewarnaan tisu dengan tinta India
- 6 Referensi
Yayasan
Tinta Nigrosine dan India bertindak dengan cara yang sama; oleh karena itu, salah satu dari kedua zat tersebut dapat digunakan secara bergantian.
Teknik ini disebut pewarnaan negatif karena bertindak berlawanan dengan teknik pewarnaan lainnya. Dalam hal ini yang tetap tidak ternoda adalah struktur yang dicari atau yang ingin Anda lihat; yaitu, mikroorganisme.
Oleh karena itu, pewarnaan didasarkan pada pewarnaan bagian bawah noda dalam warna gelap. Dalam skenario ini struktur tertutup akan disorot dalam warna terang atau tidak berwarna.
Secara umum, ragi diamati bersifat refringent, dikelilingi oleh lingkaran cahaya yang jelas yang sesuai dengan kapsul. Ini terjadi karena tinta Cina dan nigrosin adalah zat yang tidak dapat menembus polisakarida yang membentuk kapsul mikroorganisme hidup..
Perlu dicatat bahwa struktur lain yang mungkin ada dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah, tidak menembus.
Sekarang, jika mikroorganisme mati, tingtur dapat menembus di dalamnya, sedemikian rupa sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk mengevaluasi kelayakan mikroorganisme..
Teknik
Materi
Nigrosine
Nigroine berutang namanya dengan warna hitam yang dimilikinya. Ini adalah zat sintetis yang diperoleh dengan memanaskan campuran senyawa organik - seperti nitrobenzine, anilin dan anilin hidroklorida - menggunakan katalis (besi atau tembaga) dalam reaksi tersebut..
Tinta cina
Tinta Cina adalah zat yang digunakan terutama oleh orang Asia untuk menulis, membuat karya seni dan lukisan monokromatik. Ini sangat populer dalam budaya Cina.
Itu diperoleh dari tinta cumi yang dicampur dengan bubuk batu bara, hasil pembakaran pohon-pohon resin kecil.
Dimungkinkan juga untuk menyiapkannya dari jelaga pembakaran hidrokarbon (minyak nabati), bersama dengan protein gelatin yang memberikannya konsistensi yang tepat untuk mencegah pengendapan partikel karbon.
Spesifikasi untuk pengambilan sampel
- Tidak perlu puasa.
- Sampel CSF, dahak atau cairan steril harus mengandung setidaknya 1 ml volume dan harus dipindahkan ke suhu kamar di laboratorium segera.
- CSF dan sampel cairan steril harus diambil oleh dokter spesialis.
- Ini juga bisa menjadi kultur murni dari strain yang dicurigai terkait dengan patogen tersebut.
Eksekusi teknik dengan sampel langsung
- Sampel harus disentrifugasi, kemudian supernatan dibuang dan sedimen diambil.
- Setetes bahan disentrifugasi (sedimen) dan setetes tinta Cina atau nigrosin ditempatkan pada slide yang bersih..
- Ini harus dicampur dengan baik dan ditutup dengan slip penutup, memungkinkan drop menyebar seperti film tipis tanpa melebihi tepi.
- Selanjutnya persiapan dipasang di mikroskop.
- Jika sediaan terlalu gelap, bisa diencerkan dengan air.
Eksekusi teknik dengan strain dari budaya
- Sebagian kecil dari tanaman muda diambil dengan jarum pembibitan dan dilarutkan dalam setetes tinta Cina yang sebelumnya ditempatkan pada slide bersih.
- Penutupan ditempatkan di atas.
- Diamati dalam mikroskop pada 10X dan kemudian pada 40X.
Anda juga dapat melarutkan sebagian koloni dalam air suling, dan dari sana ambil setetes dan campur dengan tinta. Dengan cara ini persiapan tidak akan terlalu tebal, sehingga memungkinkan untuk mengamati struktur secara terpisah; Jika ada aglomerasi, itu tidak akan diamati dengan baik.
Metodologi lain adalah sebagai berikut:
- Tempatkan setetes kultur dalam suspensi di salah satu ujung slide.
- Tempatkan setetes nigrosine di ujung yang sama dan aduk.
- Dengan bantuan slide lain, perluas sampel seolah-olah Anda sedang melakukan tes hematologi.
- Biarkan kering dan amati di bawah mikroskop.
Pengamatan dalam mikroskop
Pertama, Anda harus fokus dengan tujuan 10X untuk memiliki tampilan bidang yang luas. Selanjutnya, Anda harus mencari jika ada ruang yang jelas; jika ada, fokus dengan 40X untuk melihat detailnya.
Keuntungan
- Mudah dieksekusi.
- Ini adalah teknik ekonomi.
- Metode ini tidak mengharuskan apusan difiksasi menjadi panas atau bahan kimia; oleh karena itu, mikroorganisme diamati tanpa distorsi.
- Persiapan segar tidak perlu dikeringkan, sehingga dapat diamati segera, menghasilkan hasil dengan cepat.
Kerugian
Setelah berkumpul, persiapan segar harus segera diobservasi; Jika mereka dibiarkan kering, tidak mungkin lagi mengamati mereka dan yang baru.
Pewarnaan tisu dengan tinta India
Fungsi lain yang dapat dipenuhi oleh tinta Cina adalah di laboratorium patologi. Ini diterapkan pada sampel jaringan yang diangkat melalui pembedahan untuk menandai margin reseksi tumor.
Jaringan yang ditandai disemprot dengan asam asetat. Ini bertindak sebagai mordan dan mencegah agar tinta tidak keluar ketika jaringan mengalami pemrosesan rutin untuk persiapan biopsi..
Prosedur ini terdiri dari memandikan jaringan dalam alkohol dan xylene, dan kemudian menyerap dalam lilin parafin. Tanda ini memandu ahli patologi ketika mengamati jaringan, yang menunjukkan di mana margin reseksi bedah atau tempat menarik lainnya.
Referensi
- "Nigrosina". Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
- "Tinta Cina". Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 1 Okt 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J dan kolaborator. (2006). Personil Tenaga Kerja dari Komunitas Otonom Extremadura. Agenda khusus Volume IV. Editorial MAD. Seville-Spanyol, hlm. 211-212.
- Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006). Teknisi laboratorium spesialis, dari Layanan Kesehatan Galician (SERGAS). Volume khusus materi pelajaran 2. Editorial MAD. Seville-Spanyol, hlm 79-80.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologis dari Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A