Alas bedak, bahan, teknik dan kegunaan Wright



itu Noda Wrigth adalah teknik pewarnaan yang diciptakan oleh ahli patologi Amerika James Homer Wright 1902, dari pewarnaan romanowsky. Seperti Romanowsky pewarnaan tidak stabil, dimasukkan Wrigth metanol sebagai pelarut dan fiksatif.

Warna ini polikromatik, yang berarti menghasilkan beberapa warna tergantung pada struktur yang diserap pewarna. Teknik pewarnaan ini telah banyak digunakan untuk melakukan penghitungan sel darah putih diferensial dan mempelajari morfologi sel darah merah, trombosit dan leukosit dalam darah tepi dan sumsum tulang..

Penerapannya sangat penting, karena kelainan dapat dilihat pada garis sel darah yang berbeda, memfasilitasi diagnosis penyakit seperti leukemia atau infeksi bakteri atau parasit..

Mungkin ini adalah aplikasi paling umum di mana teknik ini digunakan, namun mereka bukan satu-satunya. Ini juga berguna dalam sampel selain dari darah dan sumsum tulang, seperti contoh pelepasan hidung, lendir tinja, dahak, kulit, antara lain..

Indeks

  • 1 noda Foundation Wright
  • 2 Bahan
    • 2.1 Persiapan
    • 2.2 Larutan buffer buffer
    • 2.3 Bahan tambahan yang dibutuhkan untuk melakukan pewarnaan
  • 3 Komponen noda Wright
    • 3.1 Metanol
    • 3.2 Peredam kejut
    • 3,3 Eosin (Y)
    • 3,4 Metilen biru
  • 4 Teknik
  • 5 Utilitas
    • 5.1 Hematologi
    • 5.2 Sekresi Hidung
    • 5.3 Parasitologi
    • 5.4 Infeksi pernapasan
    • 5.5 Bakteriologi
    • 5.6 Mikologi
  • 6 Bagaimana struktur sampel darah diamati dengan pewarnaan Wright??
  • 7 Rekomendasi untuk pewarnaan yang baik
  • 8 Kesalahan umum dalam pewarnaan Wrigth
    • 8.1 Pewarnaan sangat pucat
    • 8.2 Presipitat pewarna
    • 8.3 Coreng dengan warna sangat kemerahan atau biru
  • 9 Mode penyimpanan
  • 10 Referensi

Yayasan pewarnaan Wright

Pewarnaan Wright lahir dari pewarnaan Romanowsky, yang terdiri dari larutan metil alkohol dari pewarna asam (eosin Y) dan pewarna dasar (metilen biru) dan produk-produk oksidasinya..

Campuran pewarna yang digunakan dalam pewarnaan Wright menyebabkan efek yang dikenal sebagai Romanowsky, yaitu memberikan pewarnaan ungu yang indah ke inti leukosit dan ke butiran neutrofilik, sedangkan sel darah merah diwarnai merah muda..

Komponen yang bertanggung jawab untuk memberikan kisaran warna yang khas dari pewarnaan Wright adalah biru B dan eosin Y. Efek yang diamati akan tergantung pada pengikatan pewarna pada struktur kimia dan interaksi antara B biru dan eosin Y.

Struktur asam seperti asam nukleat, protein nukleus dan sitoplasma imatur imatur beberapa jenis sel, memperbaiki biru B (pewarna dasar).

Sementara struktur dasar seperti hemoglobin, butiran eosinofil tersegmentasi, di antara struktur seluler lainnya, memperbaiki eosin Y (pewarna asam).

Hasil pewarnaan dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti pewarna pH Wright, buffer dan mencuci; dan waktu pewarnaan dan memperbaiki.

Karena itu, setiap langkah dalam persiapan reagen sangat penting dan harus dilakukan dengan memperhatikan setiap detail.

Materi

Wright mewarnai. Untuk 100 mL diperlukan:

Timbang 0,3 gr pewarna Wright, ukur 97 ml metanol dan 3 ml gliserol.

Persiapan

Di tempat mortir jumlah ditimbang pewarna Wright dan menggabungkan secara bertahap gliserol sampai bubuk benar-benar dibubarkan.

Kemudian metanol ditambahkan, dicampur dan dituangkan ke dalam botol kuning.

Sebelum menggunakan solusi harus dikocok dengan gerakan lembut dan filter.

Buffer buffer

Dalam liter air suling, 3,76 g disodium hidrofosfat (Na2HPO4   2 jam20) ditambah 2,1 gr kalium dihidrogen fosfat (KH)2PO4).

Campur sangat baik sampai semua reagen yang dimasukkan larut. Sesuaikan pH ke 7.2. Tuang ke dalam stoples kaca dan simpan pada suhu kamar.

Bahan tambahan dibutuhkan untuk melakukan pewarnaan

Selain itu, bahan lain yang diperlukan untuk melakukan teknik pewarnaan, yaitu: lembaran yang membawa benda atau menutupi benda, jembatan pewarnaan, pisetas dengan air atau penyangga untuk dicuci, stopwatch untuk mengambil waktu pewarnaan dan beberapa bahan pengeringan (kertas penyerap, kain kasa atau kapas).

Komponen pewarnaan Wright

Metanol

Alkohol (metanol) berfungsi sebagai fiksatif dari apusan darah ke slide.

Pada dasarnya ini adalah pereaksi pereduksi, dehidrator dan fiksatif koagulan. Oleh karena itu, fungsinya adalah untuk membekukan protein dan membuatnya tidak larut, tetapi tanpa mendenaturasinya.

Methanol adalah reagen yang digunakan untuk melampirkan lebih smear di semua laboratorium karena memberikan hasil yang lebih baik dari yang diperoleh dengan etanol. Konsentrasi yang ideal adalah 99%.

Peredam kejut

Buffer (buffered solution) memiliki fungsi menyesuaikan atau mempertahankan pH zat warna, karena pH yang disesuaikan dengan 7.2 sangat penting bagi struktur sel untuk menyerap zat warna dengan baik..

Di sisi lain, bagian dari fiksasi metanol mendehidrasi sel dan buffer membantu untuk mengehidrasi kembali sel-sel tersebut.

Eosin (Y)

Eosin memiliki afinitas untuk komponen dasar karena merupakan pewarna asam. Dua jenis eosin sangat mirip satu sama lain, sehingga salah satu dari keduanya dapat digunakan, memperoleh hasil yang sama.

Satu disebut eosin Y, kuning eosin atau tetrabromofluorescein dan yang lainnya eosin B, erythrosin B kebiruan atau dibromodinitrofluorescein. Namun, eosin Y adalah yang paling umum digunakan.

Sifat paling penting dari pewarna ini adalah polaritas negatifnya, ini membuatnya tertarik oleh struktur seluler dengan muatan positif.

Metilen biru

Ini adalah pewarnaan dasar. Sifat utamanya adalah metachromasia, yaitu, tidak semua struktur akan diwarnai dengan warna yang sama, itu tergantung pada komposisi kimiawi dari struktur yang diwarnai..

Beberapa akan berubah menjadi terang atau biru tua dan yang lainnya ungu gelap atau ungu pucat.

Teknik

1-Lakukan penyebaran sampel sehingga film tipis tetap, baik pada slide atau kaca penutup.

2-Biarkan udara mengering selama sekitar 2 jam.

3-Tempatkan apusan kering pada jembatan pewarnaan atau wadah pewarnaan dengan sampel tersebar ke atas.

4-Tutupi lembaran dengan pewarna Wright setetes demi setetes hingga menutupi seluruh permukaan. Biarkan selama 5 - 8 menit.

5-Pewarna harus benar-benar menutupi slide, tanpa menumpahkan pinggirannya. Jika selama waktu pewarnaan mulai menguap, tetes tambahan harus ditempatkan.

6-Selanjutnya tambahkan jumlah yang sama dari peredam kejut, tiupkan sedikit sampai kilau logam yang khas muncul. Ambil 10 hingga 15 menit.

7-Cuci dengan air keran, letakkan jet lembut sampai lembaran terlihat merah muda.

8-Dengan kasa diresapi alkohol, singkirkan pewarna yang menempel di bagian belakang slide.

9-Biarkan apusan mengering dengan sangat baik sebelum menempatkan minyak imersi untuk memvisualisasikannya dalam mikroskop.

Utilitas

Hematologi

Ini sangat ideal untuk mengolesi apusan darah tepi, untuk memeriksa apusan darah kental dan untuk mempelajari sel dari sampel sumsum tulang.

Karena sifat kimia kombinasi pewarna ini, struktur seluler dapat dengan mudah dikenali, karena mampu membedakan berbagai jenis sel yang ada..

Sekresi hidung

Teknik ini sangat berguna untuk mengidentifikasi sel-sel dari sekresi hidung (sel epitel, eosinofil tersegmentasi, polimorfonuklear) dalam diagnosis rinitis alergi.

Parasitologi

Dalam pengertian ini, telah berguna untuk studi Leishmania sp dalam histiosit jaringan seluler subkutan di ulkus kulit. Demikian juga, ini digunakan untuk mengidentifikasi leukosit dalam sampel feses (leucogram tinja).

Dalam hal ini, ada hal yang menarik ke dokter untuk mengetahui apakah leukositosis ini dalam tinja adalah dengan polimorfonuklear atau mononuklear. Temuan ini dalam panduan leukogram fecal jika itu adalah infeksi bakteri atau virus masing-masing.

Di sisi lain, parasit yang bersirkulasi dalam darah dapat ditemukan di dalam eritrosit atau bebas dalam plasma. Parasit yang diinginkan adalah Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii dan filarias, dan dalam kedokteran hewan bermanfaat dalam pencarian Theileria equi dan Babesia caballi, agen penyebab bayi, terutama di kuda.

Pewarnaan Wright dan Giemsa dapat membedakan hemoparasit dari komponen seluler normal. Untuk ini, Anda dapat menggunakan dua jenis spread:

Peregangan halus

Darah menyebar seperti film tipis pada slide. Diwarnai dengan noda Wright, mengungkapkan karakteristik nukleus dan sitoplasma.

Penurunan tebal

Metodologi ini digunakan untuk menyelidiki keberadaan parasit dalam jumlah darah yang lebih besar.

Untuk itu ditempatkan pada slide penurunan besar darah. Sesampai di sana harus desfibrinar, lingkaran yang semakin besar dari pusat ke luar, menggunakan tepi slide lain.

Akhirnya, untuk mengamati parasit pada apusan tebal, eritrosit harus dilisis dengan air..

Infeksi pernapasan

Pada tingkat pernapasan teknik ini juga berguna, karena sel-sel hadir dalam sampel dahak, bronkial atau bronchoalveolar lavage, penting untuk menegakkan diagnosis..

Demikian juga, sel polimorfonuklear dan sel mononuklear dapat dibedakan di sini.

Bakteriologi

Penggunaan teknik ini dalam bakteriologi terbatas, karena tidak baik untuk pewarnaan bakteri, itu sebabnya untuk pewarnaan mereka teknik pewarnaan khusus lainnya digunakan.

Namun, telah digunakan untuk mencari sel epitel dengan badan inklusi Chlamydia trachomatis pada mukosa uretra atau endoserviks, walaupun harus diakui bahwa ini bukan metode terbaik untuk ini..

Juga dimungkinkan untuk mengamati bakteri tipe spiral di antara sel darah merah Borrelia burgdorferi pada pasien yang terinfeksi, serta morulae atau badan inklusi Ehrlichia sp dalam sitoplasma limfosit, monosit atau neutrofil dalam apusan darah.

Mikologi

itu Histoplasma capsulatum adalah jamur patogen yang sering didiagnosis dengan pengamatan mikroskopis dari berbagai sampel jaringan, diwarnai dengan pewarnaan Wright.

Bagaimana struktur sampel darah diamati dengan pewarnaan Wright?

Rekomendasi untuk pewarnaan yang baik

Perluasan sampel darah harus dikeringkan secara spontan di udara. Apusan harus setipis mungkin untuk mendapatkan fiksasi pewarna yang lebih baik dan menghindari overcollorations.

Untuk pewarnaan yang berkualitas tinggi, disarankan untuk melakukan pewarnaan selama dua jam setelah persiapan apusan. Di sisi lain, sampel yang ideal adalah darah kapiler, tanpa antikoagulan.

Namun, jika darah vena digunakan, itu harus digunakan sebagai antikoagulan EDTA dan bukan heparin, karena yang terakhir dapat merusak struktur sel..

Untuk mencegah kerusakan pewarna yang disiapkan harus disimpan di tempat-tempat kering.

Selama proses pencucian, direkomendasikan penggunaan air yang disesuaikan dengan pH netral.

Akhirnya, disarankan untuk menguji metode pewarnaan yang sering digunakan di laboratorium.

Ini dilakukan dengan mewarnai sampel atau pola yang diperluas, sebagai kontrol kualitas. Langkah ini penting, karena ini memastikan bahwa pewarnaan dipersiapkan dengan baik dan waktu pewarnaan terstandarisasi dengan baik.

Jika lembar pola berwarna buruk, maka ada masalah yang harus diselesaikan.

Kesalahan umum dalam pewarnaan Wrigth

Pewarnaan sangat pucat

Corengan sangat pucat, biasanya karena pewarnaan yang sangat singkat atau pencucian yang terlalu berlebihan. Itu dikoreksi dengan memperpanjang waktu kontak dengan pewarna atau dengan mengurangi waktu pencucian.

Pewarna mengendap

Adanya endapan zat warna dalam apusan dapat memiliki beberapa penyebab, namun, penyebab yang paling sering adalah: penggunaan pewarna tanpa filter, pewarnaan pada jembatan pewarnaan yang tidak merata, menggunakan lembaran kotor dengan debu atau minyak, tidak melakukan pencucian yang baik pada Selesaikan pewarnaan.

Coreng dengan warna sangat kemerahan atau biru

Buffer bertanggung jawab atas pH pewarna. Pewarna dengan pH di bawah yang ditunjukkan (asam) akan menghasilkan noda yang sangat merah.

Jika pH pewarna di atas (alkali) akan diperoleh noda yang sangat kebiruan.

Mode penyimpanan

Pereaksi harus disimpan pada suhu kamar.

Referensi

  1. Gutiérrez V. Studi banding antara metode pewarnaan Wright dan tes Elisa untuk diagnosis kanina Ehrlichiosis di kota San Pedro Sula, Honduras. 2008. Gelar Skripsi untuk mendaftar untuk Gelar Dokter Hewan. Universitas San Carlos de Guatemala.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Pewarnaan dasar di laboratorium mikrobiologi. Penelitian tentang Disabilitas. 2014; 3 (1): 10-18.
  3. "Noda Wright." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 18 Mei 2018, 12:05 UTC. 8 Des 2018, 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Frekuensi Babesia spp. di horses of montería, Córdoba (Kolombia). Pendeta udcaactual divulgient.  2013; 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A.
  6. Retamales E, Mazo V. Lembaga Kesehatan Masyarakat Pemerintah Chili. Rekomendasi untuk pewarnaan noda darah untuk membaca hitung darah.