Noda oleh May Grünwald-Giemsa, teknik dan kegunaan



itu Mungkin noda Grünwald-Giemsa o Pappenheim adalah teknik pewarnaan diferensial yang mencampurkan pereaksi Giemsa dan May Grünwald. Hal ini digunakan untuk diferensiasi sel darah normal dan abnormal pada apusan darah tepi dan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan bagian histologis dan sampel sitologi..

Kedua reagen - Gemsa dan May Grünwald - berasal dari pewarnaan tipe Romanowsky, teknik yang didasarkan pada kombinasi asam dan pewarna dasar.

Giemsa meningkatkan teknik dengan menstabilkan campuran eosin, biru metilen dan turunannya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan methylene blue, menggunakan metanol sebagai pelarut. Kombinasi strategis ini telah memberikan hasil yang sangat baik.

Meskipun dalam hal pengamatan morfologi sel bertindak serupa dengan pewarnaan Giemsa dan Wright, teknik ini meningkatkan yang sebelumnya dengan menyempurnakan pewarnaan parasit yang menyebabkan malaria, penyakit Chagas, leishmaniasis dan trichomoniasis.

Selain itu, telah terbukti menjadi teknik yang sangat berguna untuk studi sitologi cairan sperma. Telah disorot tidak hanya dengan menunjukkan karakteristik morfologis sperma, tetapi juga memungkinkan untuk membedakan dengan leukosit efisiensi tinggi, sel epitel dan sel spermatogenesis.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Ragam pewarna
  • 2 Teknik
    • 2.1 Bahan
    • 2.2 Larutan pewarna pekat May Grünwald
    • 2.3 Pewarna Giemsa pekat
    • 2.4 Persiapan larutan buffer pada pH 7.2
    • 2.5 Pewarnaan darah atau prosedur pewarnaan sumsum tulang
    • 2.6 Teknik pewarnaan cairan sperma yang diperluas
    • 2.7 Spesifikasi penting
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Sitologi vagina
    • 3.2 Sampel sperma
  • 4 Referensi

Yayasan

Teknik ini mengikuti dasar pewarnaan Romanowsky, di mana pewarna asam memiliki afinitas selektif untuk komponen dasar seluler dan komponen asam menarik pewarna dasar.

Dijelaskan dengan cara lain, baik struktur sel dan pewarna memiliki muatan listrik positif atau negatif; biaya yang sama ditolak dan biaya yang berbeda ditarik.

Misalnya, pewarna dasar seperti metilen biru bermuatan positif dan tertarik oleh struktur bermuatan negatif. Itulah sebabnya pewarna ini menodai inti yang kaya akan DNA dan RNA yang memiliki gugus fosfat bermuatan negatif.

Butiran basofil tersegmentasi dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandung RNA juga ternoda.

Demikian juga, pewarna asam membawa muatan negatif, itulah sebabnya ia bergabung dengan struktur bermuatan positif seperti eritrosit dan butiran eosinofil tersegmentasi. Sedangkan untuk butiran neutrofil tersegmentasi, ini memperbaiki kedua pewarna.

Berbagai pewarna

Dalam teknik ini, kombinasi reaksi antara pewarna ortokromatik dan metakromatik hidup berdampingan. Orthochromatics (eosin dan metilen biru) mengikat struktur sel yang terkait dan memberikan warna yang stabil yang tidak bervariasi..

Di sisi lain, metakromatik (turunan dari metilen biru azure A dan azure B), memvariasikan warna asli mereka setelah mereka terikat pada struktur tertentu, dan bahkan mungkin ada berbagai warna.

Akhirnya, langkah yang dilakukan oleh solusi May Grünwald membutuhkan keberadaan air, karena tanpanya pewarna akan menembus struktur tetapi tidak akan diperbaiki. Agar ini terjadi, pewarna harus menjadi kutub atau terionisasi, dan dengan demikian dapat mengendap dan melekat pada struktur terkait.

Teknik

Materi

- Slide untuk slide.

- Jembatan pewarnaan.

- Solusi dari May-Grünwald.

- Noda Giemsa.

- Air suling.

Larutan pewarna pekat May Grünwald

Kita harus menimbang 0,25 g biru eosin-metilen (pewarna menurut May Grünwald) dan melarutkan dalam 100 ml metanol. Campuran kemudian dicampur selama 1 jam dan dibiarkan diam selama 24 jam. Selesai waktu, itu menyaring.

Untuk menerapkan teknik ini, pewarna May Grünwald harus diencerkan sebagai berikut: untuk 200 ml pewarna yang diencerkan, 30 ml larutan pekat diukur, 20 ml larutan buffer dan 150 ml air suling yang disesuaikan dengan pH7.2-7.3 ditambahkan. . Kemudian dicampur dan disaring.

Pewarna Giemsa pekat

Timbang 0,5 g biru azur-eosin-metilen (pewarna menurut Giemsa), larut dalam 50 ml metanol dan tempatkan 50 ml gliserin dalam campuran.

Untuk melakukan teknik ini, encerkan 1:10 dengan larutan buffer dan biarkan selama 10 menit. Itu bisa disaring jika perlu.

Persiapan larutan buffer pada pH 7.2

Mereka harus ditimbang:

- 40 mg potassium di-hydrogen phosphate (KH2PO4).

- 151 mg di-natrium hidrogen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua senyawa dilarutkan dalam 100 ml air.

Pewarnaan darah atau prosedur pewarnaan sumsum tulang

Ada dua modalitas: klasik dan cepat.

Mode klasik

  1. Tutupi noda selama 2 atau 3 menit dengan larutan May-Grünwald yang diencerkan.
  2. Cuci dengan air suling buffer untuk menghilangkan solusi sebelumnya.
  3. Tutup dengan larutan pencuci buffer yang sama dan biarkan selama 1 menit. Idenya adalah bahwa pewarna sebelumnya melekat pada struktur dan pada saat yang sama, sel-sel terhidrasi.
  4. Tambahkan 12 tetes tingtur Giemsa encer ke dalam air buffer dan tiup untuk mencampur dan menghomogenisasi. Diamkan selama 15 atau 20 menit.
  5. Cuci apusan dengan air suling buffer dan taruh di udara kering.
  6. Fokus dan amati dalam mikroskop optik sel-sel darah yang diwarnai menggunakan tujuan 40X. Jika perlu, 100X dapat digunakan.

Mode cepat

  1. Tutupi apusan dengan pewarna May Grünwald yang diencerkan selama 1 menit.
  2. Cuci dengan air suling buffer.
  3. Tutup dengan air buffer dan diamkan selama 1 menit.
  4. Tempatkan pewarna Giemsa yang diencerkan dan biarkan selama 5 menit.
  5. Cuci dengan air suling buffer dan biarkan udara kering.

Teknik yang dijelaskan di sini adalah panduan panduan, tetapi harus diperhitungkan bahwa prosedur dan waktu pewarnaan bervariasi sesuai dengan rumah komersial yang memasok reagen. Dianjurkan untuk mengikuti langkah-langkah yang ditunjukkan secara ketat oleh setiap rumah komersial.

Cairan sperma diperpanjang teknik pewarnaan

1- Tutupi penyebaran dengan lapisan tipis larutan May Grünwald selama 4 menit.

2- Lepaskan pewarna dan cuci dengan air suling.

3- Tempatkan lapisan Giemsa encer (1:10) dalam air suling selama 15 menit.

4- Lepaskan pewarna dan cuci dengan air suling.

5- Biarkan kering dan amati di bawah mikroskop.

Spesifikasi penting

Teknik ini mensyaratkan bahwa pereaksi dan larutan pencuci memiliki pH yang disesuaikan dengan 7.2-7.3, sehingga afinitas pewarna untuk struktur sel tidak mengubah dan tidak memvariasikan warna akhir yang diharapkan..

Penggunaan

Teknik ini digunakan oleh laboratorium klinis untuk menodai noda darah tepi dan sumsum tulang, bagian jaringan dan sitologi.

Dalam bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam studi kelainan sel dalam hal bentuk, ukuran dan jumlah. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.

Selain itu, ia menyajikan utilitas luar biasa ketika mencari parasit di bidang hematologi (Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi) atau histologis (Leishmanias sp).

Sitologi vagina

Adapun sitologi vagina, teknik ini sangat menguntungkan untuk pengamatan Trichomonas vaginalis. Ini adalah temuan penting, karena kehadirannya mensimulasikan gambar karsinoma di situ yang kemudian menghilang saat parasit dihilangkan.

Sampel sperma

Ini telah menjadi alat yang ideal untuk mempelajari sampel sperma, karena memberikan informasi berharga tentang kualitas sperma.

Data yang ditawarkan berkaitan terutama dengan jumlah dan morfologi, serta dengan sel-sel bersamaan yang mungkin ada dan yang sangat penting, seperti sel germinal, leukosit dan sel epitel..

Dengan analisis ini dimungkinkan untuk menggambarkan kelainan yang diamati pada sperma di kepala, leher, bagian tengah dan bagian utama.

Selain itu, mereka juga dapat membantu menunjukkan kasus hemospermia (adanya sel darah merah di dalam semen) dan leucospermia atau pyospermia (peningkatan jumlah leukosit dalam air mani).

Referensi

  1. Costamagna S, Prado M. Validasi tes segar, May Grünwald-Giemsa dan Gram warna dan media kultur untuk diagnosis Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Tersedia dalam: scielo.
  2. Laboratorium Merck KGaA. Semoga Grünwald eosin methylene blue untuk mikroskopi.
  3. "Noda May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratorium Kimia Kaca Panreac. Reagen untuk teknik histologis, hematologi dan mikrobiologi. Tersedia di: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Rekomendasi untuk pewarnaan noda darah untuk membaca jumlah darah. Laboratorium Biomedis Nasional dan Referensi. Institut Kesehatan Masyarakat Chili.
  6. Sarabia L. Spermiogram sesuai dengan kriteria WHO. Program Anatomi dan Biologi pembangunan. Fakultas Kedokteran Universitas Chili Tersedia di: pp.centramerica.com