Pondasi, persiapan dan penggunaan kaldu tetrationat



itu kaldu tetrasiate atau TT kaldu adalah media kultur cair selektif untuk pengayaan dan pemulihan strain Salmonella. Itu dibuat oleh Müeller dan kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann, untuk alasan itu ada orang yang menyebutnya kaldu Müeller-Kauffmann.

Media asli mengandung pepton proteosa, kalsium karbonat dan natrium tiosulfat. Kauffmann menambahkan garam empedu dan menciptakan modalitas lain dengan warna hijau cerah. Zat-zat ini menghambat pertumbuhan coliform, meninggalkan medium bebas untuk pengembangan bakteri patogen, dalam hal ini Salmonella.

Modifikasi itu sangat sukses karena secara signifikan meningkatkan sensitivitas medium. Oleh karena itu, saat ini berguna untuk mencari Salmonella dalam semua jenis sampel, tetapi terutama untuk kotoran dan makanan padat atau cair..

Persiapannya terdiri dari dua fase; media komersial adalah dasar untuk menyiapkan kaldu tetrationat, dan selanjutnya agar tetrationat terbentuk, larutan iodin teriodinasi ditambahkan untuk melengkapi medium.

American Public Health Association (APHA) merekomendasikan penggunaan kaldu tethionate yang dilengkapi dengan hijau terang untuk pengayaan sampel untuk mencari Salmonella, karena lebih selektif daripada kaldu tetrationat dan kaldu selenite.

Secara umum, kaldu tetrationat sangat ideal ketika bakteri dari genus Salmonella dicurigai dalam jumlah kecil atau disalahgunakan oleh paparan zat penghambat atau oleh proses industri yang meminimalkan kelayakannya..

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 - Tetrationat
    • 2.2 -Variante tetrationate kaldu dengan hijau cerah
  • 3 Gunakan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Rekomendasi
  • 6 Referensi

Yayasan

Pepton ini sesuai dengan pencernaan pankreas kasein dan pencernaan peptik jaringan hewan. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen dan nutrisi secara umum untuk pertumbuhan bakteri.

Untuk bagiannya, natrium tiosulfat bereaksi dengan larutan iodinasi untuk membentuk tetrationat. Ini menghambat pertumbuhan coliform dan mendukung perkembangan bakteri yang mengandung enzim tetrationat reduktase, di antaranya adalah genus Salmonella, tetapi juga Proteus..

Garam empedu juga bertindak sebagai zat penghambat sebagian besar bakteri Gram-positif dan beberapa bakteri Gram-negatif (coliform).

Kalsium karbonat menyerap zat beracun yang dihasilkan oleh dekomposisi tetrationat, yang membentuk asam sulfat. Dalam hal ini, kalsium karbonat menetralkan keasaman menjaga pH medium stabil.

Dalam kasus modalitas hijau cerah, zat ini meningkatkan daya selektif kaldu tetrationat dengan menghambat mikroorganisme lain selain genus Salmonella..

Persiapan

-Kaldu tetrasiate

Solusi yodium yodium

Timbang:

  • 6 gr yodium.
  • 5 gram kalium iodida.

Kalium iodida dilarutkan dalam sekitar 5 ml air suling steril, kemudian yodium ditambahkan sedikit demi sedikit sementara campuran dipanaskan. Setelah larut sepenuhnya diisi dengan air suling steril sampai mencapai volume akhir 20 ml.

Setengah alas untuk kaldu tetrationat

Timbang 46 gram medium kering dan gantung dalam 1 liter air suling steril. Campur dan panaskan sampai larut sepenuhnya, bisa mendidih hanya beberapa menit. Jangan mensterilkan dalam autoklaf. Basis media dibiarkan dingin hingga sekitar 45 ° C dan pada saat itu ditambahkan 20 ml larutan iodinasi..

Setelah menambahkan solusi iodurada ke media harus segera digunakan. Jika Anda tidak ingin menggunakan seluruh campuran, lanjutkan sebagai berikut:

10 ml media dasar didistribusikan dalam tabung, dan hanya 0,2 ml larutan beryodium ditambahkan ke yang akan diinokulasi dengan sampel..

Mereka yang tidak akan digunakan masih dapat disimpan dalam lemari es, namun, karena medianya tidak disterilkan, yang ideal adalah menyiapkan jumlah persis yang dibutuhkan..

Warna media sebelum menambahkan larutan yodium iodinasi adalah putih susu dengan endapan putih dan setelah menambahkannya berwarna coklat dengan endapan padat. Endapan yang diamati adalah normal dan sesuai dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir medium adalah 8,4 ± 0,2.

-Varian kaldu tetrationat dengan hijau cerah

Untuk menyiapkan kaldu tetrationat dengan hijau terang, semua langkah yang dijelaskan di atas dilakukan, tetapi selain itu, 10 ml larutan hijau cerah yang disiapkan pada 0,1% akan ditambahkan ke dalam campuran..

Hijau terang

Solusi ini disiapkan sebagai berikut:

Timbang 0,1 g hijau terang dan gantungkan dalam 100 ml air suling. Panaskan sampai mendidih untuk mencapai pembubaran totalnya. Simpan dalam botol kuning.

Gunakan

Untuk sampel feses (feses kultur) protokolnya adalah sebagai berikut:

Suntikkan 1 g tinja padat atau 1 ml tinja cair dalam tabung dengan 10 ml kaldu tetrationat siap pakai. Kocok kuat-kuat dan inkubasi dalam aerobiosis pada suhu 43 ° C selama 6-24 jam.

Selanjutnya, ambil alikuot 10 hingga 20 μl kaldu dan subkultur dalam medium selektif untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar hijau cerah, agar enterik Hektoen, antara lain..

Secara paralel, media selektif untuk Salmonella harus diinokulasi dengan sampel langsung (feses) tanpa pengayaan. Untuk sampel penyeka rektum, unduh bahan yang dikumpulkan dalam tabung dan lanjutkan seperti dijelaskan di atas.

Untuk sampel makanan timbang 10 g makanan padat atau 10 ml makanan cair dan inokulasi botol dengan 100 ml kaldu tetrationat siap pakai. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti dijelaskan di atas tetapi inkubasi pada suhu 37 ° C.

Seperti yang bisa dilihat, hubungan antara sampel dan kaldu akan selalu 1:10.

Kontrol kualitas

Untuk menguji media kultur, galur kontrol yang dikenal dapat digunakan. Yang paling umum digunakan adalah strain bersertifikat ATCC.

Strain yang akan digunakan adalah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Untuk strain Salmonella perkembangan yang baik diharapkan, sementara Escherichia coli mungkin memiliki perkembangan yang lemah atau teratur, dan galur Gram positif (Enterococcus dan Staphylococcus) sebagian atau seluruhnya dihambat.

Rekomendasi

-Karena media ini tidak menghambat pertumbuhan Proteus, beberapa laboratorium menggunakan novobiocin 40 mg / L untuk mencegah perkembangan strain mikroba ini. Antibiotik harus ditambahkan sebelum larutan yodium beryodium.

-Setelah menyiapkan media termasuk larutan yodium beryodium, seharusnya tidak lebih dari 2 jam setelah inokulasi.

-Pada saat mendistribusikan medium dalam tabung, campuran harus dihomogenisasi secara terus menerus untuk menyadarkan kembali endapan yang terbentuk..

-Dalam sampel yang kurang terkontaminasi kaldu tetrationat diinkubasi pada 35-37 ° C, dan dalam sampel yang sangat terkontaminasi, direkomendasikan inkubasi pada suhu 43 ° C..

Referensi

  1. Laboratorium Conda Pronadisa. 2010. Basis kaldu tetrationat menurut Müeller-Kauffmann. Tersedia di:
  2. Laboratorium BD 2003. Basis Kaldu Tetrationat. Tersedia di:
  3. Laboratorium Britania. 2015. Basis kaldu tionionat. Tersedia di:
  4. Media BBL. 2005. Persiapan tabung untuk budidaya spesies Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, M Vivas-Rosel, Franco-Monsreal J. Perbandingan antara media kultur natrium selenite dan tetrationat natrium, keduanya diinkubasi pada suhu 37 ° C dan 42 ° C untuk isolasi Salmonella spp tinja pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220