Pondasi, persiapan dan penggunaan kaldu kedelai



itu kaldu kedelai tripticaseína Ini adalah media kultur cair, sangat bergizi dan tidak selektif. Karena fleksibilitasnya yang besar, ini adalah salah satu media kultur cair yang paling banyak digunakan di laboratorium mikrobiologi.

Ia juga dikenal sebagai kaldu tripticasa kedelai atau kecambah casein-soy, yang singkatannya adalah TSB untuk akronimnya dalam bahasa Inggris Tryptic saya Kaldu atau CST untuk akronimnya dalam bahasa Spanyol. Penggunaannya sangat bervariasi karena komposisinya. Ini terdiri dari triptein, pepton kedelai, natrium klorida, dipotassium fosfat dan glukosa.

Ia mampu mereproduksi bakteri patogen yang penting secara klinis, termasuk bakteri yang menuntut nutrisi dan bakteri anaerob. Beberapa jamur dan kontaminan oportunistik juga dapat berkembang di lingkungan ini.

Karena daya nutrisinya yang tinggi, ia memiliki sensitivitas yang tinggi untuk mendeteksi kontaminasi mikroba, untuk alasan ini dipilih oleh USDA Animal and Plant Health Inspection Service untuk analisis mikrobiologis vaksin..

Demikian juga, sup kedelai triptikase memenuhi persyaratan farmakope yang berbeda (EP Eropa, JP Jepang dan USP Amerika Utara) untuk studi mikrobiologis produk di tingkat industri, seperti kosmetik dan makanan.

Di sisi lain, perlu disebutkan bahwa meskipun memiliki kegunaan yang besar, media ini relatif murah, sehingga terjangkau untuk sebagian besar laboratorium mikrobiologi. Ini juga sangat mudah untuk dipersiapkan.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 kedelai Trypticamine
    • 2.2 -Berbagai kaldu kedelai tripticasein
  • 3 Gunakan
  • 4 Diunggulkan
  • 5 Kontrol kualitas
  • 6 Keterbatasan
  • 7 Referensi

Yayasan

Tripteína, pepton, dan glukosa memberinya khasiat bergizi yang penting untuk mengubahnya menjadi media yang ideal untuk perkembangan mikroba yang cepat.

Sekitar 6 hingga 8 jam inkubasi sudah dapat terlihat pertumbuhan pada sebagian besar mikroorganisme. Namun, ada strain yang tumbuh lambat yang dapat bertahan selama berhari-hari untuk tumbuh.

Natrium klorida dan dipotassium fosfat masing-masing bertindak sebagai kesetimbangan osmotik dan pengatur pH. Kehadiran pertumbuhan dibuktikan dengan munculnya kekeruhan dalam medium; jika tidak ada pertumbuhan medium tetap tembus.

Karena warnanya yang terang, dimungkinkan untuk mengamati produksi pigmen, seperti yang ditunjukkan pada gambar yang terletak di awal artikel, yang sesuai dengan pigmen yang diproduksi oleh Pseudomonas aeruginosa. 

Persiapan

-Kaldu kedelai tryptic

Untuk menyiapkan kaldu kedelai tripticase, timbang 30 gram media komersial kering pada skala digital. Kemudian larut dalam satu liter air suling yang terkandung dalam fiola.

Campuran dibiarkan selama 5 menit dan kemudian dibawa ke sumber panas untuk membantu pembubaran media. Ini harus sering dikocok sambil mendidih selama 1 menit.

Setelah dibubarkan itu didistribusikan dalam tabung dengan ukuran yang sesuai sesuai kebutuhan. Tabung dengan sumbat kapas atau topi bakelite dapat digunakan. Selanjutnya, tabung disterilkan dengan media dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

PH medium harus 7,3 ± 0,2

Harus diperhitungkan bahwa warna media kultur yang didehidrasi berwarna krem ​​muda dan harus disimpan pada suhu 10 hingga 35 ° C, di tempat yang kering. Sementara kaldu yang disiapkan berwarna kuning muda dan harus disimpan dalam lemari es (2 hingga 8 ° C).

-Variasi kaldu kedelai tripticasein

Kaldu kedelai yang dimodifikasi Trypticamine dapat disiapkan dengan menambahkan garam empedu dan novobiocin agar selektif untuk isolasi E. coli. Pilihan lain untuk tujuan yang sama adalah menyiapkan kaldu kedelai triptikase yang dilengkapi dengan vankomisin, sefiksim dan telurium (2,5 μg / ml).

Di sisi lain, lebih banyak glukosa (0,25%) dapat ditambahkan ke kaldu kedelai trypticasein ketika tujuannya adalah untuk merangsang pembentukan biofilm..

Gunakan

Ini cukup bergizi untuk memungkinkan pertumbuhan bakteri yang mengganggu atau mengganggu seperti Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp dan Brucella sp, tidak perlu ditambah dengan darah atau serum.

Demikian juga, beberapa jamur dapat berkembang dalam kaldu ini, seperti Kompleks Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Selain itu, media ini dalam kondisi anaerob sangat ideal untuk memulihkan bakteri yang termasuk gen Clostridium, serta bakteri non-sporulasi anaerob yang penting secara klinis..

Jika ditambahkan 6,5% natrium klorida dapat digunakan untuk pertumbuhan Enterococcus dan Streptococcus Grup D lainnya.

Pada tingkat penelitian, telah sangat berguna dalam berbagai protokol, terutama dalam studi bakteri yang membentuk biofilm atau biofilm. Ini juga digunakan untuk menyiapkan suspensi bakteri pada 0,5% dari Mac Farland yang diperlukan untuk melakukan antibiogram dengan metode Kirby dan Bauer.

Dalam hal ini diambil 3 sampai 5 koloni dengan penampilan yang sama dan diemulsi dalam 4-5 ml kaldu kedelai trypticasein. Kemudian diinkubasi selama 2 hingga 6 jam pada 35-37 ° C dan selanjutnya disesuaikan dengan konsentrasi yang diinginkan menggunakan salin steril. Kaldu kedelai trypticase tidak boleh digunakan selama 18 sampai 24 jam inkubasi.

Ditaburkan

Sampel dapat ditaburkan secara langsung atau koloni murni subkultur diambil dari media selektif. Inokulum harus kecil agar tidak menutupi media sebelum inkubasi.

Biasanya inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam, tetapi kondisi ini dapat bervariasi tergantung pada mikroorganisme yang dicari. Itu juga dapat diinkubasi dalam kondisi anaerob pada suhu 37 ° C selama beberapa hari jika perlu. Misalnya, dalam mikroorganisme yang tumbuh atau lambat dapat diinkubasi hingga 7 hari.

Dalam analisis mikrobiologis zat farmasi - seperti vaksin - protokolnya lebih ketat. Dalam kasus ini, kaldu tanpa pertumbuhan tidak dibuang sampai mencapai 14 hari inkubasi terus menerus.

Kontrol kualitas

Untuk setiap batch yang disiapkan, 1 atau 2 tabung harus diinkubasi tanpa inokulasi untuk menunjukkan sterilitas. Itu harus tetap tidak berubah.

Anda juga dapat menanam strain yang dikenal untuk mengevaluasi perilaku mereka. Di antara strain yang dapat digunakan adalah:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 atau 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kasus, pertumbuhan harus memuaskan di bawah kondisi atmosfer dan suhu yang sesuai untuk setiap mikroorganisme.

Keterbatasan

-Fermentasi glukosa menyebabkan penurunan pH medium oleh produksi asam. Ini mungkin tidak menguntungkan untuk kelangsungan hidup beberapa mikroorganisme sensitif terhadap keasaman.

-Tidak dianjurkan untuk pemeliharaan strain, karena selain keasaman, bakteri setelah beberapa hari menghabiskan nutrisi dengan akumulasi akumulasi zat beracun yang membuat lingkungan tidak ramah..

-Perawatan harus dilakukan dalam merawat semua protokol sterilitas, karena kaldu mudah terkontaminasi.

-Setelah persiapan tripticasein, kaldu kedelai tidak mencoba memindahkan kaldu ke tabung steril lainnya, karena jenis manuver ini sangat rentan terhadap kontaminasi..

Referensi

  1. Cona E. Kondisi untuk studi kerentanan yang baik dengan uji difusi agar. Pdt. Chil. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Tersedia di: scielo.org
  2. Laboratorium Inggris Tryteine ​​soya broth. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  3. Laboratorium MCD. Kaldu kedelai trytica. Tersedia di: electronic-systems.com
  4. Laboratorium neogen. Kedelai Kaldu Triptych. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluasi teknik immunoseparation magnetik untuk pemulihan Escherichia coli O157: H7 dalam krim susu. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tersedia di: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, pembentukan Finol M. Biofilm dalam isolasi Staphylococcus aureus menurut kerentanan antimikroba dan asal klinis. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Tersedia di: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolasi Escherichia coli O157: H7 dalam Sampel Kotoran Sapi Bovine Bertujuan Ganda dari Kota Miranda, Negara Bagian Zulia, Venezuela. Pendeta Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tersedia di: scielo.org