Pondasi, persiapan, dan penggunaan kaldu selenite



itu kaldu selenite Ini adalah media kultur cair selektif. Itu dirancang oleh Leifson untuk pengayaan sampel di mana keberadaan bakteri enteropatogenik dari genus Salmonella diduga..

Media ini memenuhi persyaratan dari American Public Health Association (APHA), dan karena itu diterima untuk penyelidikan keberadaan Salmonella dalam sampel tinja, urin, makanan cair atau padat, air, antara lain..

Komposisi kimia yang dimilikinya mendukung pemulihan mikroorganisme ini dan pada gilirannya menghambat pertumbuhan yang lain. Ini terutama beracun bagi sebagian besar bakteri milik Keluarga Enterobacteriaceae. Namun, itu juga memungkinkan pemulihan strain Shigella dan tidak menghambat pertumbuhan Pseudomonas dan Proteus..

Ini terdiri dari selenit natrium hidrogen anhidrat, natrium fosfat anhidrat, pepton dan laktosa. Ada juga varian yang ditambahkan sistin, maka namanya kalen selenit-sistin.

Saat ini, penggunaan kaldu selenit-sistin lebih disukai, karena persentase yang lebih tinggi dari pemulihan Salmonella diperoleh, setara dengan yang diamati dengan media selektif lain dengan tujuan yang sama, seperti kaldu natrium Tetrationat..

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 - Selena
    • 2.2 -Persiapan media komersial
    • 2.3 Varian kaldu selenite-sistin
  • 3 Penggunaan
  • 4 Diunggulkan
  • 5 Kontrol kualitas
  • 6 Keterbatasan
  • 7 Referensi

Yayasan

Pepton yang terkandung dalam kaldu berfungsi sebagai nutrisi untuk pengembangan mikroorganisme yang tepat. Strain Salmonella menggunakan pepton sebagai sumber nitrogen, vitamin dan asam amino.

Laktosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi, sedangkan natrium selenite adalah zat penghambat yang memperlambat pertumbuhan bakteri Gram positif dan sebagian besar bakteri hadir dalam flora usus, terutama dari keluarga Enterobacteriaceae. Sodium fosfat adalah penyangga yang menstabilkan pH medium.

Dalam kasus varian kaldu selenit yang mengandung L-sistin, senyawa tambahan ini adalah zat pereduksi yang meminimalkan toksisitas selenit, sehingga meningkatkan pemulihan Salmonella.

Persiapan

-Kaldu selenite

Jika Anda memiliki komponen campuran, Anda dapat menimbang:

4 gr natrium hidrogen selenit anhidrat.

10 g natrium fosfat anhidrat.

5 gr peptonas.

4 gr laktosa.

Larutkan senyawa dalam 1 liter air suling steril. Dapat dipanaskan sedikit agar larut sepenuhnya.

Beberapa laboratorium mengekspos medium selama 10 menit dalam uap lancar untuk mensterilkannya, karena autoclave tidak boleh digunakan. Jika media disterilkan, dapat disimpan dalam lemari es sampai digunakan.

Ini juga dapat dibuat tanpa mensterilkan dan melayani langsung 10 sampai 15 ml ke tabung reaksi steril.

Dalam hal ini, itu harus dibiarkan beristirahat dan digunakan segera. Karena media tidak steril, tidak dapat disimpan dalam lemari es untuk digunakan nanti.

-Persiapan media komersial

Jika media komersial tersedia, 23 g media dehidrasi ditimbang dan dilarutkan dalam satu liter air suling steril. Hangatkan sebentar sampai selesai larut. Jangan mensterilkan dalam autoklaf. Sajikan secara aseptik 10 atau 15 ml dalam tabung reaksi steril.

PH akhir medium harus 7,0 ± 0,2.

Perlu dicatat bahwa warna media dehidrasi berwarna krem ​​dan sediaannya bening dan bening tembus cahaya.

Varian selenite-sistin kaldu

Ini mengandung senyawa yang sama dari kaldu selenite, tetapi 10 mg sistin ditambahkan. Sisa prosedur sama persis seperti yang dijelaskan di atas.

Penggunaan

Media ini khusus untuk digunakan dalam studi epidemiologi, dalam kasus di mana penyakit ini tidak dalam tahap akut, pasien tanpa gejala atau pembawa yang sehat.

Isolasi genus Salmonella biasanya sulit, karena mereka biasanya ditemukan mencemari sampel dengan cara yang langka. Berada dalam jumlah kecil mudah tumpang tindih dengan pertumbuhan genera bakteri lain yang ditemukan dalam jumlah yang lebih besar.

Di sisi lain, bahan baku makanan olahan diproses sering terkena panas, proses dehidrasi, penggunaan desinfektan, radiasi dan pengawet, antara lain..

Oleh karena itu, Salmonella hadir dalam bahan baku diperlakukan dengan salah dengan penyerahan produk ke proses industri tersebut. Demikian juga, dalam kasus sampel klinis seperti feses, jenisnya mungkin lemah jika berasal dari pasien yang telah diobati dengan antibiotik..

Oleh karena itu, setiap sampel yang diduga mengandung Salmonella harus diperkaya terlebih dahulu dalam kaldu laktosa, dan kemudian diperkaya dalam kaldu selenit untuk mengoptimalkan pemulihannya dalam media selektif, seperti agar-agar SS, agar-agar xylose, lysine deoxycholate (XLD) ), agar Hektoen enterik (HE) dan agar hijau-cerah, antara lain.

Ditaburkan

Untuk sampel tinja, ambil 1 g sampel dan gantung dalam tabung dengan 10 hingga 15 ml kaldu selenite. Jika feses cair, ambil 1 ml dan tunda dalam kaldu. Untuk apusan rektal, buang bahan apusan ke dalam kaldu.

Dalam sampel makanan padat ambil 1 gr dan ditunda dalam kaldu selenite.

Dalam makanan cair, campurkan bagian yang sama dengan kaldu selenite dengan konsentrasi ganda.

Untuk sampel urine centrifuge, buang supernatan, ambil semua sedimen dan tunda di selenite broth.

Kaldu diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam inkubasi. Pertumbuhan bakteri dibuktikan dengan kekeruhan. Tabung tambahan per sampel juga dapat dimasukkan untuk diinkubasi pada 42 ° C. Selanjutnya, taburkan media padat selektif dari kaldu selenite.

Kontrol kualitas

Untuk mengontrol sterilitas, kaldu selenite dari setiap batch tanpa inokulasi diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam. Diharapkan bahwa tidak ada kekeruhan, atau perubahan warna medium.

Untuk mengontrol fungsi media yang baik, strain yang dikenal dapat digunakan, seperti:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 dan Proteus mirabilis ATCC 43071.

Hasil yang diharapkan adalah:

  • Untuk tiga jenis bakteri pertama, pertumbuhannya harus memuaskan.
  • Untuk Escherichia coli penghambatan parsial.
  • Untuk Proteus pertumbuhan sedang.

Keterbatasan

Kaldu selenite medium beracun bagi kulit manusia, oleh karena itu kontak langsung harus dihindari.

Referensi

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, M Vivas-Rosel, Franco-Monsreal J. Perbandingan antara media kultur natrium selenite dan tetrationat natrium, keduanya diinkubasi pada suhu 37 ° C dan 42 ° C untuk isolasi Salmonella tinja pembawa tinja. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratorium Britania. Selenito Caldo. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  3. Laboratorium Neogen Kalen selenito Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sandand N, Soto -Valela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Isolasi mikrobiologis dari Salmonella spp. dan alat molekuler untuk pendeteksiannya. Kesehatan, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tersedia di: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.