Pondasi, persiapan dan penggunaan air pepton



itu air peptonada itu adalah media pengayaan cairan non-selektif, digunakan terutama sebagai pengencer untuk sampel makanan atau bahan lainnya. Ini berarti dari sudut pandang kimia sangat sederhana, mengandung pepton daging, natrium klorida dan air.

Ini memiliki nilai gizi tertentu, yang memungkinkan untuk memperkaya sampel. Jika ada bakteri yang babak belur, ini berarti memiliki kekuatan untuk memperbaiki kelangsungan hidup. Ini sangat berguna dalam pemulihan bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae.

Dalam kasus pemulihan Salmonellas, direkomendasikan untuk menggunakan varian air peptonada yang disangga; Ini berfungsi sebagai sarana pra-pengayaan sampel, dalam hal ini mengandung unsur-unsur lain seperti disodium fosfat dan dipotassium fosfat.

Biasanya air peptonada dibuat pada pH netral, namun ada varian lain di mana perlu bahwa pH adalah 8,5 ± 0,2 (alkali), karena bakteri yang akan diisolasi adalah alkalofilik, seperti misalnya Vibrio cholerae.

Di sisi lain, media ini dapat digunakan sebagai media dasar untuk tes fermentasi karbohidrat.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Persiapan rumah (non-komersial)
    • 2.2 Persiapan menggunakan media komersial
    • 2.3 Persiapan untuk uji fermentasi
    • 2.4 Varian air peptonada lainnya
  • 3 Gunakan
    • 3.1 Sampel tinja
    • 3.2 Sampel makanan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Peptone menyediakan nutrisi yang dibutuhkan untuk pengembangan bakteri, terutama nitrogen dan asam amino rantai pendek, sementara natrium klorida menjaga keseimbangan osmotik.

Selain itu, media memungkinkan membubarkan, menghomogenisasi, dan memperbaiki sel bakteri yang telah rusak oleh proses industri..

Sebagai pengencer itu ideal, efektif menggantikan solusi fisiologis (SSF) atau buffer fosfat (PBS).

Pertumbuhan bakteri terlihat dengan mengamati kekeruhannya.

Persiapan

Persiapan buatan sendiri (non-komersial)

Timbang 1 g pepton dan 8,5 g natrium klorida, larut dalam 1 liter air suling. PH harus disesuaikan dengan 7.0. Untuk ini, Anda dapat menggunakan 1 N natrium klorida.

Persiapan menggunakan media komersial

Timbang 15 gr media kering dan larutkan dalam satu liter air suling. Menghomogenkan campuran. Jika perlu, campuran direbus selama 1 menit untuk membantu pembubaran total. Sajikan dalam 100 ml vial atau dalam 10 ml tabung sesuai kebutuhan. Autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

Dinginkan dan gunakan atau simpan di lemari es. PH akhir medium adalah 7,2 ± 0,2.

Warna medium yang didehidrasi berwarna krem ​​muda dan disiapkan berwarna kuning muda.

Persiapan untuk uji fermentasi

Untuk persiapan sebelumnya - sebelum sterilisasi - karbohidrat harus ditambahkan ke konsentrasi akhir 1%, ditambah indikator Andrade (asam fuchsin) atau fenol merah (0,018 g / L). Lonceng Durham untuk pengamatan pembentukan gas harus ditempatkan pada tabung.

Varian air peptonada lainnya

-Air pepton buffered atau buffered

Ini mengandung hidrolisat enzimatik kasein, natrium klorida, kalium dihidrogen fosfat dan natrium hidrogen fosfat dodecahidrat. PH akhir adalah 7,0 ± 0,2.

Untuk persiapannya, timbang 20 g medium kering dan larutkan dalam 1 liter air suling. Diamkan selama kurang lebih 5 menit. Panaskan selama 1 menit sampai larut sepenuhnya.

Tuang ke dalam botol yang sesuai sesuai kebutuhan. Sterilkan menggunakan autoclave pada 121 ° C selama 15 menit.

-Air pepton alkali

Timbang 25 g media dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Lanjutkan seperti dijelaskan di atas. PH berkisar antara 8,3 hingga 8,7.

Gunakan

Inokulum dilakukan dengan menempatkan sampel secara langsung.

Ini digunakan untuk mencairkan sampel, terutama ketika diduga ada bakteri yang rusak. Biasanya pengencerannya adalah 1:10 dan 1: 100.

Inkubasi selama 24 jam dalam aerobiosis pada 35-37 ° C.

Sampel tinja

Untuk sampel tinja yang mencari Salmonella, dianjurkan untuk menggunakan buffered water atau buffered water sebagai media pra-pengayaan..

Untuk melakukan ini, lakukan sebagai berikut:

Jika tinja terbentuk, ambil 1 g sampel. Jika cairan, ambil 1 ml tinja dan gantung dalam tabung dengan 10 ml air peptonasi buffer. Dalam kasus penyeka rektum, buang bahan yang terkandung di dalam penyeka ke dalam tabung dengan air pepton yang disangga.

Dalam semua kasus, campur dan homogenisasi sampel dengan sangat baik.

Inkubasi pada suhu 37 ° C selama 18 hingga 24 jam. Selanjutnya sub-budidaya dalam kaldu pengayaan seperti kalen selenit sistin atau kaldu tetrationat pada 37 ° C selama 18-24 jam. Akhirnya kultivasi dalam media selektif untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar Hektoen, antara lain.

Sampel makanan

Air pepton digunakan sebagai media pengayaan atau sebagai pengencer sederhana, tetapi jika spesies Salmonella dicari, itu digunakan sebagai media pra-pengayaan, seperti yang telah dijelaskan..

Dalam makanan lanjutkan sebagai berikut:

Untuk makanan padat timbang 25 gr sampel dan untuk makanan cair ukur 25 ml. Tempatkan bagian tersebut dalam labu berisi 225 ml air peptonated. Campur dan homogenkan sampel.

Jika diduga bahwa beban mikroba adalah pengenceran seri tinggi atau desimal dapat dilakukan untuk memfasilitasi penghitungan unit pembentuk koloni (CFU).

Jumlah pengenceran akan tergantung pada jenis sampel dan pengalaman analitis.

Jika sebaliknya diduga bahwa beban mikroba sangat rendah, tidak perlu membuat pengenceran. Selanjutnya, subkultur dalam media selektif.

Dalam hal makanan dari laut, seperti makanan laut, ikan, antara lain, mencari Vibrio cholerae atau spesies Vibrio lainnya, air pepton yang disesuaikan dengan pH 8,5 (air alkali peptonasi) harus digunakan.

Kontrol kualitas

Dari setiap batch yang disiapkan, satu atau dua tabung harus diinkubasi tanpa inokulasi selama 24 jam dalam aerobiosis pada 37 ° C. Pada akhir waktu, tidak ada kekeruhan atau perubahan warna yang harus diamati.

Juga, strain kontrol yang terkenal dapat digunakan untuk mengevaluasi efektivitasnya:

Untuk ini, strain bakteri berikut dapat digunakan: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Dalam semua kasus perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, yang diamati oleh kekeruhan medium.

Keterbatasan

-Media dehidrasi sangat higroskopis, sehingga harus dijauhkan dari kelembaban.

-Media tidak boleh digunakan jika beberapa jenis kerusakan diamati.

-Media kultur dehidrasi harus disimpan antara 10 - 35 ° C

-Media yang disiapkan harus disimpan dalam lemari pendingin (2-8 ° C).

Referensi

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. Teknik untuk Analisis Mikrobiologis Makanan. 2009, edisi ke-2. Fakultas Kimia, UNAM. Meksiko Versi untuk Administrator Manual dan Dokumen (AMyD) Fakultas Kimia, UNAM 1. Tersedia di: http://depa.fquim.unam.mx
  2. Laboratorium Britania. Air peptonada yang disangga. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  3. Laboratorium Neogen Air pepton. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  4. Laboratorium Britania. Air pepton. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  5. Laboratorium Merck Air pepton yang disangga. Tersedia di: merckmillipore.com
  6. Laboratorium Conda Pronadisa. Air pepton alkali. Tersedia di: condalab.com
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.