Yayasan Vogel-Johnson Agar, persiapan dan penggunaan



itu Vogel-Johnson agar adalah media kultur yang solid, selektif dan diferensial, diformulasikan khusus untuk isolasi Staphylococcus aureus. Media ini dibuat oleh Vogel dan Johnson pada tahun 1960 dari modifikasi agar-agar glisin tellurite yang diformulasikan pada tahun 1955 oleh Zebovitz, Evans dan Niven.

modifikasi terdiri dari peningkatan konsentrasi manitol hadir dalam menengah dan penggabungan indikator pH. Rumus saat ini terdiri dari ekstrak trypticase ragi, manitol, dipotassium fosfat, lithium klorida, glisin, fenol merah, agar-agar, kalium tellurite solusi 1% dan air.

Perlu dicatat bahwa ada cara lain yang, seperti agar Vogel-Johnson, selektif untuk isolasi S. aureus, seperti agar mannitol asin dan agar Baird Parker. Dalam pengertian ini, dapat dikatakan bahwa dasar agar Vogel-Johnson adalah campuran antara agar-agar manitol asin dan agar-agar Baird Parker..

Di koloni pertama S. aureus Mereka dibedakan dengan fermentasi manitol dan mengubah indikator pH menjadi kuning. Di sisi lain, di bagian kedua S. aureus ini ditandai dengan mengurangi telurium menjadi telurium dan membentuk koloni abu-abu sampai hitam. Kedua sifat tersebut diamati pada agar Vogel-Johnson.

Media ini, seperti rekan-rekannya, berguna untuk mendeteksi Staphylococcus aureus dalam sampel makanan, kontrol sanitasi produk industri dan dalam sampel klinis.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kontribusi nutrisi
    • 1.2 Kekuatan selektif
    • 1.3 Kekuatan diferensial
    • 1.4 Keseimbangan dan agen penguat osmotik
  • 2 Persiapan
    • 2.1 1% b / v larutan kalium telurium
    • 2.2 media dasar agar Vogel-Johnson
  • 3 Gunakan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Kontribusi nutrisi

Media Vogel-Johnson mengandung ekstrak triptein dan ragi; kedua zat ini menyediakan asam amino rantai panjang yang berfungsi sebagai sumber karbon dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Bakteri yang mampu tumbuh di media ini akan mengambil nutrisi dari zat-zat ini.

Kekuatan selektif

Agar Vogel-Johnson mampu menghambat pertumbuhan bakteri Gram-negatif dan bahkan beberapa bakteri Gram-positif, mendukung pengembangan stafilokokus koagulase-positif. Zat penghambatnya adalah potasium tellurite, litium klorida, dan glisin.

Kekuatan diferensial

Zat yang membuat media diferensial ini adalah manitol dan kalium tellurit. Mannitol adalah karbohidrat, dan ketika difermentasi, asam diproduksi yang mengubah media dari merah menjadi kuning, yang terjadi berkat adanya indikator pH fenol merah.

Sementara itu, tellurite yang tidak berwarna ketika direduksi menjadi telluride bebas logam, membutuhkan warna abu-abu gelap hingga hitam.

itu Staphylococcus aureus memfermentasi manitol dan mengurangi telurium menjadi telurium. Itu sebabnya koloni khas S. aureus di media ini mereka abu-abu atau hitam dikelilingi oleh media kuning.

Bakteri tumbuh di media ini dan tidak mengurangi tellurite atau fermentasi manitol, bentuk yang lebih intens dari koloni transparan warna asli dikelilingi oleh merah media karena alkalisasi medium dengan menggunakan peptones.

Di sisi lain, bakteri yang mengurangi telurium tetapi tidak memfermentasi manitol akan tumbuh sebagai koloni abu-abu atau hitam yang dikelilingi oleh warna merah tua.

Jika media disiapkan tanpa penambahan kalium tellurite, koloni S. aureus mereka akan berkembang sebagai koloni kuning, dikelilingi oleh media kuning, seperti dalam agar manitol asin.

Keseimbangan dan agen pemadat osmotik

Dipotassium fosfat mempertahankan keseimbangan osmotik medium dan menyesuaikan pH ke netralitas 7.2. Sedangkan agar memberikan konsistensi yang solid pada media kultur.

Persiapan

Larutan tellurite kalium 1% b / v

Larutan ini tidak termasuk dalam media dehidrasi, karena tidak dapat disterilkan dalam autoklaf. Untuk alasan ini disiapkan secara terpisah dan ditambahkan ke media yang disterilkan.

Beberapa rumah komersial menjual larutan potursium tellurite 1% siap pakai. Jika Anda ingin mempersiapkan di laboratorium, lakukan sebagai berikut:

Timbang 1,0 g kalium telurium dan ukur 100 ml air suling. Larutkan telurium potasium di bagian air dan lengkapi jumlah air sampai Anda mencapai 100 ml. Sterilkan larutan dengan metode filtrasi.

Media dasar agar Vogel-Johnson

Timbang 60 g media dehidrasi, dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran dipanaskan sampai mendidih untuk membantu dalam disolusi sempurna. Selama proses pembubaran, media sering gelisah.

Sterilkan dalam autoklaf pada tekanan 15 pon dan 121 ° C selama 15 menit. Lepaskan dari autoklaf dan biarkan hingga media mencapai suhu sekitar 45 hingga 50 ° C. Tambahkan 20 ml larutan potursium tellurite yang telah disiapkan sebelumnya ke 1%.

Campur dan tuangkan ke dalam cawan petri steril. Biarkan mengeras dan pesan terbalik di plaquers untuk disimpan nanti di lemari es sampai digunakan.

PH akhir media yang disiapkan harus pada 7,2 ± 0,2.

Sebelum menanam sampel, tunggu sampai piring mengambil suhu sekitar.

Warna media yang disiapkan adalah merah.

Gunakan

Meskipun dapat digunakan untuk isolasi S. aureus dalam semua jenis sampel, sebagian besar digunakan untuk analisis mikrobiologis produk farmasi, kosmetik dan makanan.

Disarankan agar inokulum padat. Pembibitan dapat dilakukan dengan pergoresan dengan pegangan platinum atau permukaan dengan Drigalski spatula.

Pelat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.

Kontrol kualitas

Untuk melakukan kontrol kualitas media Vogel-Johnson, strain kontrol berikut dapat digunakan:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: untuk strain S. aureus Pertumbuhan yang memuaskan dengan koloni hitam dikelilingi oleh media kuning. Untuk S. epidermidis pertumbuhan teratur dengan koloni hitam tembus cahaya atau dikelilingi oleh media merah.

Demikian juga untuk E. coli diharapkan akan ada penghambatan total, dan untuk Proteus mirabilis penghambatan sebagian atau total; jika tumbuh ia akan melakukannya dengan hemat dan koloni akan berwarna hitam dikelilingi oleh warna merah sedang.

Referensi

  1. Laboratorium BD. VJ (Vogel dan Johnson Agar). 2006. Tersedia di: bd.com
  2. Laboratorium Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  3. Laboratorium Britania. Tellurite kalium. 2015. Tersedia di: britania.com
  4. Laboratorium Himedia. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tersedia di: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel- Johnson Agar Base. Manual Mikrobiologi Merck. Edisi ke-12, hlm 502-503. Tersedia di: Pengguna / Tim / Unduhan
  6. Kontributor dari Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia ke livre ensiklopedis,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Covenin Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan Isolasi dan penghitungan Staphylococcus aureus. Tersedia di:sencamer.gob.ve