Pondasi, persiapan dan penggunaan agar hijau cerah



itu agar hijau terang itu adalah media kultur yang solid, dengan selektivitas tingkat tinggi. Ini digunakan secara eksklusif untuk isolasi strain dari genus Salmonella, namun ada beberapa pengecualian, seperti spesies typhi dan paratyphi yang tidak tumbuh di media ini..

Pencarian untuk genus Salmonella sering dalam sampel tinja, air atau makanan. Dalam pengertian ini, media ini bisa sangat berguna. Agar ini dibuat pada tahun 1925 oleh Kristensen, Lester dan Jurgens, yang kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann.

Ini terdiri dari pluripeptonas dari pencernaan peptik jaringan hewan dan pencernaan pankreas kasein, juga mengandung ekstrak ragi, natrium klorida, laktosa, sukrosa, fenol merah, hijau terang dan agar-agar.

Ini ditandai dengan menjadi media yang sangat tidak ramah untuk sebagian besar bakteri, mendukung pertumbuhan Salmonella, namun beberapa coliform mampu bertahan di dalamnya, berkembang dengan lemah..

Penting untuk digarisbawahi bahwa dalam medium ini genus Shigella tidak tumbuh dan keduanya tidak Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Oleh karena itu, jika diinginkan untuk mengisolasi mikroorganisme ini, cara lain harus digunakan, seperti agar XLD, antara lain..

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Agar hijau terang
    • 1.2 Varian agar hijau cerah (BGA)
  • 2 Persiapan
  • 3 Penggunaan / aplikasi
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Agar hijau terang

Setiap komponen yang membentuk media memiliki fungsi spesifik yang menentukan karakteristik dan sifat agar.

Pluripeptonas dan ekstrak ragi adalah sumber nutrisi dari mana mikroorganisme mengambil nitrogen dan mineral yang diperlukan untuk perkembangan mereka. Laktosa dan sukrosa adalah sumber energi bagi mikroorganisme yang mampu memfermentasi mereka.

Hijau terang adalah zat penghambat yang mencegah perkembangan bakteri Gram-positif dan sejumlah besar mikroorganisme Gram-negatif.

Sodium klorida memberikan stabilitas osmotik ke medium. Sementara fenol merah adalah indikator pH, warnanya berubah ketika mendeteksi produksi asam dari fermentasi karbohidrat..

Koloni laktosa dan sukrosa yang tidak berfermentasi tumbuh dalam media berwarna putih, merah muda atau transparan, dengan latar belakang merah. Misalnya, bakteri dari genus Salmonella.

Sementara bakteri yang memfermentasi laktosa atau sukrosa yang mampu tumbuh di media ini, mereka mengembangkan koloni berwarna kuning kehijauan atau kehijauan-kuning pada latar belakang kuning-hijau. Sebagai contoh, Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae.

Varian agar hijau cerah (BGA)

Ada varian lain agar hijau cerah; novobiocin agar hijau terang glukosa (NBG) dan novobiocin agar hijau cerah gliserol laktosa (NBGL).

Agar Novobiocin glukosa hijau terang (NBG)

Mengandung trypticase soy agar, ferric ammonium citrate, sodium thiosulfate pentahydrate, fenol merah, glukosa, hijau terang, novobiocin dan air suling.

Berfungsi untuk isolasi koloni Salmonella dari sampel tinja.

Dalam hal ini hijau terang dan novobiocin adalah zat penghambat yang mencegah pertumbuhan bakteri Gram positif dan beberapa mikroorganisme Gram negatif.

Sodium tiosulfat adalah sumber sulfur dan besi sitrat adalah sumber zat besi, keduanya diperlukan untuk mengungkap produksi hidrogen sulfida melalui pembentukan endapan hitam dari besi sulfida.

Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi dan fenol merah adalah indikator pH.

Dalam media ini koloni Salmonella berkembang besar dengan pusat hitam dikelilingi oleh lingkaran cahaya kemerahan dan diikuti oleh area yang terlihat jelas. Beberapa strain Citrobacter freundii menghasilkan koloni yang identik dengan Salmonella.

Agar-agar novobiocin gliserol laktosa hijau terang (NBGL)

Media ini mengandung trypticase soy agar, ferric ammonium citrate, sodium thiosulfate, laktosa, gliserol, hijau terang, novobiocin dan air suling.

Perbedaan media ini dengan yang sebelumnya adalah bahwa glukosa digantikan oleh laktosa dan gliserol dan fenol merah tidak digunakan..

Media ini juga digunakan untuk mengisolasi spesies Salmonella, koloni berkembang menjadi hitam, dengan produksi hidrogen sulfida.

Hanya koloni yang tidak menghasilkan asam dari gliserol atau laktosa yang mencapai produksi H2Sudah cukup, karena pH rendah mengganggu pembentukan H2S. Ini menghasilkan koloni tak berwarna untuk sebagian besar spesies Proteus dan Citrobacter.

Persiapan

-Timbang 58 gram media kering yang diperoleh secara komersial. Tambahkan satu liter air suling ganda. Campur, diamkan beberapa menit dan kirimkan persiapan ke sumber panas sampai larut sepenuhnya.

-Autoclave pada 121 ° C selama 15 menit, jangan melebihi waktu sterilisasi.

-Diamkan dan sajikan panas dalam cawan petri steril. PH akhir harus 6,9 ± 0,2.

-Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan. Sebelum menanam, piring harus memiliki suhu ruang.

-Medium serbuk berwarna hijau dan siap untuk mengambil warna oranye-coklat atau kemerahan-hijau, tergantung pada pH dan rumah komersial. Warna yang sangat coklat menunjukkan bahwa agar-agar terlalu panas.

-Setelah agar dipadatkan, tidak disarankan untuk menyusun kembali, karena medianya memburuk.

Penggunaan / aplikasi

Media ini digunakan untuk mencari strain dari genus Salmonella dari sampel tinja dan makanan susu, antara lain..

Karena ini merupakan lingkungan yang agak tidak ramah, disarankan untuk menanam inokulum yang berlimpah jika sampel langsung digunakan. Jika tidak, pra-pengayaan dan pengayaan spesimen harus dilakukan sebelum penanaman di media ini.

Karena beberapa jenis Salmonella dihambat atau tumbuh dengan susah payah, disarankan untuk menemani media ini dengan agar selektif lainnya untuk Salmonella.

Semua koloni dengan karakteristik Salmonella harus menjalani tes biokimia untuk identifikasi definitif.

Kontrol kualitas

Untuk menguji fungsi media agar hijau terang yang baik, strain ATCC dapat digunakan untuk mengamati perkembangan yang sama di atasnya..

Strain yang paling sering digunakan untuk kontrol kualitas adalah: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

3 yang pertama harus memberikan koloni putih merah muda atau transparan pada latar belakang merah. Salmonella dengan perkembangan baik dan Proteus dengan pertumbuhan jarang atau teratur.

Klebsiella dan Escherichia diharapkan koloni kuning kekuningan dengan latar kuning dan dalam kasus Shigella dan Staphylococcus harus dihambat.

Media yang didehidrasi harus disimpan pada suhu kamar, di tempat yang kering, karena medianya sangat higroskopis.

Referensi

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Agar Hijau Cemerlang. 2009
  2. Laboratorium Inggris Agar Hijau Cerah. 2015.
  3. Laboratorium BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologis dari Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A