Agar, persiapan dan penggunaan TSI agar



itu Agar TSI atau agar-agar zat besi tiga kali lipat adalah media kultur padat yang berfungsi sebagai tes biokimia untuk memandu identifikasi awal basil Gram negatif. Hal ini didasarkan pada bukti fermentasi gula yang ada, dan produksi hidrogen sulfida dan gas.

Komposisi dan fondasinya sangat mirip dengan uji besi Kligler, dengan perbedaan bahwa yang terakhir hanya mengandung glukosa dan laktosa. Sebaliknya, seperti namanya, besi tiga zat besi mengandung tiga karbohidrat yang dapat difermentasi: glukosa, laktosa dan sukrosa..

Selain itu, media TSI memiliki empat turunan protein yang membuatnya agar sangat bergizi: ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton, dan proteosa pepton. Ini juga mengandung besi amonium sulfat, natrium tiosulfat, natrium klorida, fenol merah dan agar.

Ketidakmampuan mikroorganisme untuk memfermentasi glukosa yang ada dalam media segera mengeluarkannya dari milik Keluarga Enterobacteriaceae. Oleh karena itu, tes ini sangat penting untuk memutuskan rute identifikasi yang harus diambil untuk menentukan genus dan spesies.

Setiap laboratorium memutuskan apakah itu bekerja dengan agar TSI atau agar agar Kligler.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Sodium klorida dan agar-agar
    • 1.2 indikator pH (fenol merah)
    • 1.3 Turunan protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan proteosa pepton)
    • 1.4 Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)
    • 1.5 Produksi gas
    • 1.6 Natrium tiosulfat dan besi amonium sulfat (produksi hidrogen sulfida)
  • 2 Persiapan
  • 3 Penggunaan
  • 4 Diunggulkan
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Masing-masing senyawa memenuhi fungsi dalam medium.

Sodium klorida dan agar

Natrium klorida diperlukan untuk menjaga keseimbangan osmotik medium. Sementara agar memberikan konsistensi yang solid.

Indikator PH (fenol merah)

PH media yang disiapkan seimbang menjadi 7,3 dan indikator pH (fenol merah) berubah menjadi kuning di bawah 6,8. Ini berarti bahwa sejumlah kecil asam yang dihasilkan oleh fermentasi gula akan mengubah medium dari merah-oranye menjadi kuning.

Jika fermentasi tidak terjadi akan ada alkalinisasi media dengan menggunakan pepton, berubah dari merah-oranye ke merah kuat.

Turunan protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan proteosa pepton)

Ketika bakteri memetabolisme protein yang ada dalam agar TSI, amina diproduksi yang mengalkalisasi medium (terutama pada tingkat bevel), karena reaksi membutuhkan oksigen. Amina mengubah bezel menjadi merah pekat.

Tetapi ini akan tergantung pada kemampuan bakteri untuk memfermentasi karbohidrat atau tidak.

Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Studi tentang fermentasi gula dapat memberikan beberapa gambar dan masing-masing ditafsirkan secara berbeda. Interpretasi tes membagi mikroorganisme menjadi 3 kategori: fermentor non-glukosa, fermentor non-laktosa dan fermentasi laktosa / sukrosa.

Perlu dicatat bahwa jumlah glukosa dalam medium terbatas, sedangkan konsentrasi laktosa dan sukrosa 10 kali lebih tinggi.

Bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisme pengumpul glukosa lainnya akan mulai memfermentasi gula ini karena merupakan karbohidrat paling sederhana untuk energi..

Di sisi lain, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang harus dipecah dan diubah menjadi glukosa sehingga mereka dapat memasuki siklus Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisme glukosa non-fermentasi

Ketika mikroorganisme yang diinokulasi tidak mampu memfermentasi glukosa, apalagi bisa memfermentasi karbohidrat lain. Karena itu, asam tidak terbentuk di sini, tetapi ada pembentukan amina di bevel karena penggunaan pepton.

Dalam hal ini, bevel berubah menjadi merah yang lebih kuat dan bagian bawah tabung dapat tetap tidak berubah atau juga dapat menjadi basa, meninggalkan seluruh tabung merah.

Interpretasi: K / K berarti latar belakang alkali / alkali atau netral

Pada gambar yang ada di awal artikel lihat gambar tabung D.

Hasil ini menunjukkan bahwa mikroorganisme bukan milik Keluarga Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisme non-fermentasi laktosa / sukrosa

Jika bakteri mampu memfermentasi glukosa tetapi tidak laktosa atau sukrosa, hal berikut akan terjadi:

Bakteri akan mengkonsumsi semua glukosa yang ada setelah sekitar 6 hingga 8 jam, mampu mengasamkan bevel dan taco; artinya, agar-agar akan benar-benar berubah menjadi kuning. Tetapi ketika glukosa habis dan ketidakmampuan untuk menggunakan laktosa dan sukrosa, bakteri akan memulai metabolisme protein.

Reaksi ini membutuhkan oksigen, oleh karena itu degradasi pepton terjadi di permukaan (bevel). Amina menghasilkan basa bezel dengan mengubah warna kuning menjadi merah. Reaksi ini dibuktikan pada 18 hingga 24 jam inkubasi.

Interpretasi: K / A berarti bevel alkali dan asam taco.

Pada gambar yang ada di awal artikel lihat gambar tabung B.

-Mikroorganisme pengolah laktosa / sukrosa

Jelas, mikroorganisme yang mampu memfermentasi laktosa dan sukrosa dapat memfermentasi glukosa. Setelah jumlah minimum glukosa yang ada dalam medium habis, piruvat yang terbentuk mulai bermetabolisme membentuk asam melalui siklus aerobik Krebs, dan dalam periode 8 hingga 12 jam semua medium akan berwarna kuning..

Jika bakteri mampu memecah laktosa atau sukrosa, asam akan terus diproduksi, dan setelah 18 hingga 24 jam seluruh tabung - paruh dan taco - akan tetap berwarna kuning.

Perlu dicatat bahwa penggunaan glukosa dilakukan dengan dua cara: satu dalam bentuk aerobik di bevel tabung, dan yang lainnya secara anaerob di bagian bawah tabung..

Interpretasi: A / A berarti bevel asam / asam bawah. Dapat menyajikan gas atau tidak.

Pada gambar yang ada di awal artikel lihat gambar tabung A.

Produksi gas

Beberapa mikroorganisme mampu menghasilkan gas selama fermentasi gula. Gas dibuktikan dalam tabung dengan tekanan yang diberikan di dalam agar-agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau perpindahan agar-agar. Kadang-kadang pembentukan gas dapat memecah media.

Adalah penting bahwa pada saat penyemaian media TSI, tusukan dibuat bersih oleh pusat agar sampai mencapai bagian bawah. Jika tusukan dialihkan ke dinding tabung, itu dapat menyebabkan positif palsu dalam produksi gas, karena akan keluar melalui saluran yang terbentuk secara salah..

Produksi gas, serta reaksi-reaksi yang terjadi pada agar-agar, membutuhkan oksigen, oleh karena itu disarankan agar tabung ditutup dengan sumbat kapas, dan jika tutup bakelite digunakan, maka sebaiknya tidak sepenuhnya disesuaikan..

Produksi gas dilaporkan positif (+) atau negatif (-).

Sodium tiosulfat dan besi amonium sulfat (produksi hidrogen sulfida)

Bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna), mengambil sulfur natrium tiosulfat yang ada dalam medium. Setelah huruf H terbentuk2S bereaksi dengan besi amonium sulfat, menghasilkan besi sulfida (endapan hitam terlihat jelas).

Produksi H2S dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Pada gambar yang ada di awal artikel lihat gambar tabung C.

Persiapan

Timbang 62,5 gram agar-agar Gula Tiga Gula Dehidrasi (TSI) dan larut dalam satu liter air suling.

Panaskan sampai agar benar-benar larut. Rebus sebentar, aduk terus. Distribusikan 4 ml media dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan biarkan beristirahat dengan cara yang condong. Harus diperhatikan bahwa alas dan bezel memiliki jarak yang sama.

Simpan dalam lemari es 2-8 ° C. Biarkan meredamnya sebelum menanam strain bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda dan media disiapkan merah-oranye

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 7,3 ± 0,2.

Penggunaan

Tes TSI banyak digunakan di tingkat laboratorium mikrobiologi. Tes ini sangat penting untuk memandu jenis tes yang harus diterapkan untuk sampai pada identifikasi genus dan spesies. Eksekusi dan interpretasinya yang baik dapat menghemat bahan dan pekerjaan.

Jika hasilnya adalah TSI K / K dan uji sitokrom oksidase positif, diketahui bahwa tes harus digunakan untuk mengidentifikasi basil Gram negatif yang tidak difermentasi, seperti Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, di antara genera lainnya. Jika oksidase negatif itu berorientasi pada genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, dll..

Di sisi lain, jika TSI A / A atau K / A diperoleh dan uji sitokrom oksidase negatif, semakin banyak nitrat direduksi menjadi nitrit, kami akan memiliki kepastian bahwa ini adalah mikroorganisme yang dimiliki oleh Keluarga Enterobacteriaceae. Dalam hal ini rute identifikasi akan berorientasi pada tes khusus untuk kelompok bakteri ini.

Di sisi lain, jika gambar K / A atau A / A diperoleh dan tes sitokrom oksidase positif, tes tambahan yang akan dipasang akan diarahkan ke identifikasi strain fermentasi yang bukan milik Keluarga Enterobacteriaceae, seperti: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan memandu identifikasi genus Keluarga Enterobacteriaceae berikut: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

Sebuah TSI dengan hidrogen sulfida langka atau sedang dalam bevel alkali dengan dasar alkali dan oksidase positif akan memandu penggunaan tes untuk identifikasi basil Gram non-fermentasi yang memproduksi H2S, seperti Shewanella putrefaciens.

Akhirnya, TSI dapat digunakan untuk penyelidikan produksi hidrogen sulfida di basil Gram-positif, terutama ketika diduga Erysipelothrix rhusiopathiae.

Ditaburkan

Media TSI harus diinokulasi dengan koloni murni, diisolasi dalam kultur primer atau selektif. Jika koloni diambil dari media selektif yang diunggulkan dengan sampel dengan campuran flora, perawatan harus diambil untuk mengambil hanya permukaan, karena di bagian bawah koloni mungkin ada strain yang layak dihambat dalam medium itu..

Oleh karena itu, loop tidak boleh didinginkan dalam media selektif untuk kemudian mengambil koloni dan menginokulasi media TSI.

Penanaman akan dilakukan dengan loop atau jarum lurus. Tusukan akan dilakukan, berhati-hati bahwa itu adalah melalui pusat tengah sampai mencapai bagian bawah, dan kemudian penanaman selesai menginokulasi permukaan dengan cara zigzag. Jangan lakukan dua tusukan.

Inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Menafsirkan saat ini, baik sebelum atau sesudah.

Keterbatasan

Tes TSI harus dibaca antara 18 hingga 24 jam inkubasi. Pembacaan sebelum waktu ini dapat memberikan hasil positif palsu fermentasi A / A. Padahal, pembacaan setelah waktu ini, dapat menimbulkan citra negatif palsu non-fermentor, karena konsumsi pepton yang membuat media menjadi alkali..

Referensi

  1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. "Agar TSI." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 Februari 2019, 03:33 Tersedia di: en.wikipedia.org
  5. Laboratorium Britania. TSI Agar (Triple iron iron agar). 2015. Tersedia di: britanialab.com
  6. Laboratorium BD Agar gula tiga lapis (Agar TSI). 2003. Tersedia di: bd.com