Yayasan Agar Thayer Martin, persiapan dan penggunaan



itu Thayer Martin agar Ini adalah media padat yang sangat bergizi dan selektif untuk isolasi Neisseria meningitidis dan Neisseria gonorrhoeae; keduanya dikenal sebagai Neisseria yang patogen atau penting secara klinis.

Salah satu fitur khusus yang paling penting dari agar-agar Thayer Martin adalah tingginya kandungan suplemen gizi. Properti ini sangat diperlukan, karena Neisserias sangat menuntut mikroorganisme dari sudut pandang nutrisi dan karena itu tidak tumbuh di media umum..

Di sisi lain, karena mikroorganisme ini biasanya ditemukan di daerah yang tidak steril, penambahan inhibitor yang menghambat pertumbuhan flora yang menyertainya diperlukan, tanpa mempengaruhi perkembangan genus Neisseria..

Agar-agar ini terdiri dari agar-agar basa GC, hemoglobin, suplemen gizi tambahan, dan zat penghambat kompleks (antibiotik dan antijamur). Rumah komersial menjual masing-masing suplemen secara terpisah.

Sampel yang akan ditanam dalam media ini akan tergantung pada mikroorganisme yang dicari. Untuk Neisseria gonorea Sampel yang ideal adalah sekresi vagina dan uretra. Sementara untuk Neisseria meningitidis sampel yang paling banyak digunakan adalah eksudat CSF, faring dan nasofaring.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Agar dasar GC
    • 1.2 Hemoglobin
    • 1.3 Suplemen pengayaan
    • 1.4 Penghambat
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Thayer Asli Martin Agar
    • 2.2 Agar Thayer Martin dimodifikasi
  • 3 Gunakan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Neisserias adalah mikroorganisme yang tergolong menyusahkan dan oleh karena itu isolasi mereka sulit. Untuk alasan ini, Thayer Martin adalah media yang kompleks dan masing-masing komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah ini:

Agar inti GC

Agar-agar GC mengandung proteosa pepton, tepung jagung, natrium klorida, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat dan agar-agar. Komponen-komponennya menyediakan nutrisi dasar untuk pengembangan mikroba, menetralkan asam lemak beracun, berkontribusi menjaga keseimbangan osmotik, menentukan pH, dan memberikan konsistensi yang solid pada lingkungan.

Hemoglobin

Hemoglobin memberikan faktor V dan X (masing-masing nicotinamide adenine dinucleotide NAD dan hemin). Karena itu, di lingkungan ini, spesies Haemophilus juga tumbuh. Hemoglobin dapat diperoleh secara komersial dalam bentuk dehidrasi atau darah sapi defibrinasi segar dapat ditambahkan ke media..

Suplemen pengayaan

Di sisi lain, suplemen pengayaan harus ditambahkan ke media Thayer-Martin, karena nutrisi yang terkandung dalam agar dasar tidak mencukupi untuk persyaratan genus Neisseria..

Suplemen pengayaan yang paling umum digunakan disebut isovitalex. Ini mengandung glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, asam p-amino benzoic, vitamin B12, thiamin dan glukosa. Semua senyawa ini diperlukan untuk pengembangan Neisseria patogen yang tepat.

Inhibitor

Karena merupakan media yang sangat bergizi, inhibitor harus digunakan untuk mencegah pertumbuhan mikroorganisme dari flora biasa di daerah tersebut dan dengan demikian mendukung isolasi genus Neisseria..

Kompleks inhibitor terdiri dari vankomisin, colistin, dan nistatin. Vankomisin menghambat pertumbuhan bakteri Gram-positif, colistin mencegah perkembangan bakteri Gram-negatif seperti Pseudomonas dan beberapa Neisseria saprofit, dan nistatin bekerja pada ragi sebagai Candida albicans.

Namun, kemudian agar Thayer Martin dimodifikasi; perubahan terdiri dari penambahan trimethoprim, peningkatan jumlah agar dan penambahan glukosa ekstra. Perubahan ini secara signifikan meningkatkan pemulihan spesies Neisseria gonorrhoeae.

Perlu dicatat bahwa trimethoprim menghambat pertumbuhan genus Proteus dan pembentukannya yang berkerumun. Dalam pengertian ini, antibiotik adalah apa yang memberikan sifat selektif pada medium Thayer Martin.

Persiapan

Thayer Asli Martin Agar

-GC Agar

Timbang 8,2 gr medium GC kering dan ditangguhkan dalam 100 ml. Campur dan didihkan selama 1 menit dengan sering diaduk agar larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

-2% hemoglobin

Tangguhkan 2 g hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas untuk membentuk campuran yang seragam. Tambahkan sedikit demi sedikit lebih banyak air untuk menyelesaikan volume 100 ml. Suspensi harus homogen sebelum sterilisasi.

Sterilkan dalam autoclave selama 15 menit.

-Suplemen pengayaan

Rekonstitusi jalan komersial dengan pengencer yang disediakan oleh rumah komersial yang sama. Aduk rata. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit..

-Suplemen penghambat V.C.N (vankomisin, colistin, nistatin)

Kembalikan botol dengan pengencer yang disediakan oleh rumah komersial. Aduk rata. Jumlah pengencer yang digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit..

-Disiapkan

Untuk setiap 100 ml agar-agar GC, lanjutkan sebagai berikut:

Ketika agar-agar GC meninggalkan autoklaf, biarkan dingin pada suhu sekitar 50 ° C dan tambahkan 2 ml larutan hemoglobin yang disiapkan, 2 ml suplemen pengayaan (isobitalex atau britalex), dan 2 ml suplemen penghambat. Campur dan sajikan dalam cawan petri steril.

Biarkan mengeras dan simpan di lemari es sampai digunakan.

Warna media yang disiapkan adalah merah ceri. PH akhir medium adalah 7,2 ± 0,2

Modifikasi Thayer Martin Agar

Timbang 8,2 gr medium GC kering dan ditangguhkan dalam 100 ml. Tambahkan 1 g agar-agar dan tambahkan 0,3 g glukosa. Campur dan didihkan selama 1 menit dengan sering diaduk agar larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Siapkan suplemen hemoglobin dan pengayaan seperti dijelaskan di atas.

Suplemen penghambat yang digunakan adalah V.C.N.T (vankomisin, colistin, nistatin, trimetoprim).

-Disiapkan

Lanjutkan seperti yang dijelaskan untuk agar Thayer Martin asli.

Gunakan

Thayer Martin agar harus marah sebelum menabur sampel. Sampel yang umum digunakan adalah eksudat faring, eksudat hidung, vagina, sekresi uretra dan / atau dubur dan CSF..

Gunakan sampel yang baru diambil dan buat inokula yang kuat pada agar. Sampel ditaburkan langsung oleh pelepasan material dan kemudian diratakan dengan penipisan pada permukaan.

Pelat diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam tabung mikroaerofilik (5% CO2). Pada akhir masa inkubasi, lempengan diperiksa untuk koloni kecil, abu-abu, dan kadang-kadang seperti mucoid..

Lakukan tes biokimia Gram dan konfirmasi untuk koloni yang mencurigakan.

Kontrol kualitas

Untuk melakukan kontrol kualitas agar-agar Thayer Martin, strain mikroba berikut dapat digunakan.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; di kedua galur diharapkan perkembangan yang memuaskan.

Strain berikut juga harus dimasukkan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Pada semuanya penghambatan total atau parsial diharapkan dalam media ini.

Keterbatasan

-Harus diingat bahwa bakteri yang resisten terhadap inhibitor yang digunakan dapat tumbuh dalam medium..

-Ada beberapa jenis Neisseria gonorea yang mungkin peka terhadap konsentrasi vankomisin yang digunakan. Untuk alasan ini, disarankan untuk menggunakan agar coklat yang ditambah dengan isovitalex secara paralel, tetapi tanpa inhibitor.

-Ada strain ragi yang resisten terhadap nistatin yang dapat tumbuh di media ini dan mengganggu isolasi Neisseria patogen, terutama gonokokus..

Referensi

  1. Laboratorium diagnostik Valtek. Agar Thayer-Martin.2016. Tersedia dalam: com
  2. Laboratorium Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Tersedia di: britanialab.com
  3. Kontributor Wikipedia. Agar Thayer-Martin. Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 26 Oktober 2017, 16:33 UTC. Tersedia di: wikipedia.org4. Diakses pada 28 Februari 2019.
  4. Laboratorium Britania. Agar-agar GC. 2010. Tersedia di: britanialab.com.
  5. Laboratorium Pengayaan Menengah BBL ™ untuk Mikroorganisme Fastidious. 1999. Tersedia di: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.