Yayasan, persiapan dan penggunaan TCBS



itu Agar TCBS adalah media kultur padat yang sangat selektif dan diferensial, terutama digunakan untuk isolasi dan kultur bakteri Vibrio Vibrio cholerae, V. vulnificus dan V. parahaemolyticus sebagai patogen utama dari genus ini.

Singkatan TCBS berarti tiosulfat sitrat empedu tiosulfat. Agar ini juga dikenal sebagai media selektif untuk Vibrios. Formula asli dibuat oleh Nakanishi dan kemudian dimodifikasi oleh Kobayashi.

Ini terdiri dari ekstrak ragi, pepton daging, triptein, natrium sitrat, natrium tiosulfat, empedu sapi, sukrosa, natrium klorida, sitrat besi, bromothymol blue, thymol blue dan agar.

Komposisi ini memungkinkan pengembangan spesies Vibrio yang memadai dari sampel air, tinja, dan makanan; kecuali untuk Vibrio hollisae, yang tidak tumbuh di media ini. Selain itu, media TCBS mampu menghambat pertumbuhan bakteri penyerta lainnya, terutama coliform.

Karena masalah gastrointestinal dan ekstra-intestinal yang parah yang dihasilkan beberapa spesies dari genus Vibrio, diagnosis mereka sangat penting. Manusia terinfeksi terutama oleh konsumsi makanan laut mentah atau kurang matang atau air yang terkontaminasi, tetapi juga melalui infeksi luka.

Karena itu, laboratorium klinis harus memasukkan agar TCBS dalam studi kultur tinja sampel tinja cair, terutama dengan penampilan air beras. Terutama jika pasien melaporkan telah melakukan kontak dengan air laut atau mengkonsumsi makanan laut atau ikan.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
  • 3 Gunakan
  • 4 Diunggulkan
  • 5 Batasan
  • 6 Kontrol kualitas
  • 7 Referensi

Yayasan

Ekstrak ragi, pepton daging, dan triptein adalah sumber nutrisi media ini. Namun, agar TCBS adalah media yang tidak ramah untuk sebagian besar bakteri.

Selektivitasnya yang tinggi diberikan oleh penambahan natrium sitrat dan empedu sapi; keduanya adalah zat penghambat yang juga memberikan pH basa ke medium, membatasi pertumbuhan flora yang menyertainya dan mendukung pertumbuhan V. cholerae, di antara spesies lainnya. Perlu dicatat bahwa Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap mulas.

Untuk bagiannya, natrium klorida menyeimbangkan secara osmotik dengan medium. Selain itu, karena konsentrasinya tinggi, ia juga bertindak sebagai zat penghambat, mendukung pertumbuhan bakteri halofilik.

Sukrosa adalah gula yang dapat difermentasi yang bersama-sama dengan indikator pH biru bromotimol dan biru timol memberikan karakter diferensial ke medium. Untuk alasan ini, dengan ini berarti dimungkinkan untuk membedakan galur fermentasi sukrosa dari galur non-fermentasi.

Koloni dari strain fermentasi sukrosa mengembangkan warna kuning dan akan mengubah medium dari hijau menjadi kuning karena produksi asam. Non-fermentor tumbuh tembus cahaya dan media tetap menjadi warna asli (hijau).

Demikian juga, media ini mengandung natrium tiosulfat sebagai sumber sulfur dan besi sitrat sebagai agen pengungkap. Keduanya menunjukkan bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna). H2S terbentuk dari tiosulfat dan kemudian bereaksi dengan besi sitrat bentuk endapan hitam yang terlihat.

Akhirnya, agar adalah yang memberikan konsistensi padat pada medium.

Persiapan

Timbang 89 gr media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Membantu pembubaran dengan pemanasan dan pengadukan yang sering. Campurannya bisa direbus selama 2 menit.

Media ini tidak autoklaf. Setelah pembubaran itu disajikan langsung di piring steril. Ketika mengeras, mereka disusun dengan cara terbalik di pembuat plak dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) sampai mereka digunakan.

Media setelah persiapan harus pada pH 8,6 ± 0,2.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​muda atau krem ​​kehijauan, dan warna mediumnya hijau hutan atau hijau kebiruan.

Penting untuk membiarkan lempeng-lempeng itu menusuk sebelum menabur sampel.

Gunakan

Sampel yang paling umum untuk isolasi Vibrio adalah tinja diare.

Sampel tinja jika tidak dapat diunggulkan segera pada media selektif, harus diangkut di tengah Cary Blair.

Untuk meningkatkan sensitivitas kultur, tinja dapat ditularkan melalui air pepton pada pH 8,4 sebagai media pengayaan maksimum selama 8 jam, dari sana disubkultur ke media TCBS..

Juga harus diingat bahwa beberapa jenis Vibrio dapat menyebabkan septikemia pada pasien yang mengalami imunosupresi, sehingga mereka dapat diisolasi dari kultur darah. Demikian juga, sampel air dan makanan dari laut dapat dianalisis ketika ada epidemi wabah penyakit kolera.

Ditaburkan

Inokulum sampel yang diteliti harus menonjol, penyemaian dilakukan dengan metode striating oleh kelelahan. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Koloni dugaan Vibrio cholerae Mereka berukuran sedang, halus, buram, dengan tepi tipis dan kuning karena mereka fermentasi sukrosa..

Dengan cara yang sama, spesies V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii dan beberapa V. vulnificus. Spesies lain dari Vibrio secara klinis penting sebagai V. parahaemolyticus jangan memfermentasi sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.

Di sisi lain, kita harus ingat bahwa beberapa strain Aeromonas dan Plesiomonas yang oksidase (+) dapat tumbuh di media ini, mengembangkan koloni kuning yang dapat membingungkan dokter. Sementara beberapa strain Pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau juga V. parahaemolyticus.

Batasan

Tes oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari agar TCBS, karena hasil yang diperoleh akan menjadi negatif palsu. Senyawa dalam medium sangat mengganggu dalam tes ini. Karena itu, harus dilakukan subkultur pada agar darah.

Kontrol kualitas

Untuk membuktikan bahwa medianya dalam kondisi baik, disarankan untuk menanam strain kontrol yang dikenal atau disertifikasi dan mengamati apakah pertumbuhannya memenuhi karakteristik yang diharapkan..

Untuk ini, alunan:

-Vibrio cholerae - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, batas tembus pandang).

-Vibrio parahaemolyticus - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan batas tembus pandang).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning dengan lingkaran cahaya dengan warna yang sama di sekitar koloni).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - penghambatan total atau sebagian (koloni kecil berwarna kuning atau tembus cahaya).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - penghambatan sebagian atau total (koloni biru).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Benar-benar terhambat.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Penghambatan total atau sebagian. (Tepi hijau pusat koloni kecil).

Inkubasi media yang tidak diinokulasi seharusnya tidak mengalami perubahan.

Referensi

  1. Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Agar TCBS. 2009. Tersedia di: f-soria.es
  2. Laboratorium BD. BD. TCBS Agar 2003. Tersedia di: bd.com
  3. Laboratorium Britania. TCBS Medium. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  4. Laboratorium Acumedia TCBS Agar. 2016. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.