Agar darah fondasi, penggunaan dan persiapan

itu agar darah itu adalah media padat yang diperkaya, diferensial tetapi tidak selektif. Ini digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan berbagai mikroorganisme dari sampel klinis atau subkultur.

Agar darah klasik harus dimasukkan untuk pembenihan sebagian besar sampel klinis yang diterima di laboratorium; kecuali untuk sampel tinja yang tidak berguna, kecuali disiapkan dengan modifikasi tertentu.

Media kultur ini pada dasarnya terdiri dari agar-agar dasar yang diperkaya dan 5% darah. Basa agar dapat bervariasi sesuai dengan kebutuhan, tetapi terutama akan terdiri dari pepton, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain.

Sedangkan untuk darah, biasanya diharuskan melakukan kontak dengan bioterium untuk mendapatkan darah dari binatang, seperti domba, kelinci atau kuda. Namun, ini tidak selalu memungkinkan dan terkadang darah manusia digunakan.

Media agar darah dapat disiapkan di laboratorium atau dibeli siap untuk perusahaan yang didedikasikan untuk itu. Persiapan media ini adalah salah satu yang paling rumit, setiap kecerobohan dalam persiapannya akan menghasilkan batch yang terkontaminasi.

Itulah sebabnya semua tindakan pencegahan yang mungkin harus diambil dan pada akhirnya kontrol kualitas harus dilakukan dengan menginkubasi pada 37 ° C 1 piring untuk setiap 100 yang disiapkan.

Indeks

• 1 Yayasan
• 2 Penggunaan
  • 2.1 Pilihan golongan darah
  • 2.2 Pilihan jenis agar dasar
  • 2.3 Penggunaan agar darah sesuai dengan media dasar yang digunakan untuk persiapannya
• 3 Persiapan
  • 3.1 Timbang dan larutkan
  • 3.2 Sterilkan
  • 3.3 Penggumpalan darah
  • 3.4 Tuang ke dalam cawan Petri
• 4 Referensi

Yayasan

Telah disebutkan bahwa agar darah memiliki karakteristik sebagai media yang diperkaya, diferensial dan tidak selektif. Ruang bawah tanah dari masing-masing properti ini dijelaskan di bawah ini.

Agar-agar darah adalah media yang diperkaya karena memiliki zat tambahan utama 5 -10% darah pada basis agar-agar. Kedua senyawa tersebut mengandung banyak nutrisi dan sifat ini memungkinkan sebagian besar bakteri yang bisa dibudidayakan tumbuh di dalamnya.

Pertumbuhan itu terjadi tanpa batasan; untuk alasan ini tidak selektif. Namun, jika senyawa ditambahkan ke media ini yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme dan mendukung pertumbuhan yang lain, ia menjadi selektif. Ini adalah kasus jika beberapa jenis antibiotik atau antijamur ditambahkan.

Demikian juga, agar darah adalah media diferensial, karena memungkinkan untuk membedakan 3 jenis bakteri: beta-hemolitik, alfa-hemolitik dan gamma-hemolitik..

Beta-hemolitik adalah yang memiliki kemampuan untuk melisiskan atau menghancurkan sel-sel darah merah, membentuk halo yang jernih di sekitar koloni, sehingga menghasilkan ß atau β hemolisis - hemolisis dan mikroorganisme disebut ß-hemolitik.

Contoh bakteri β-hemolitik adalah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolitik adalah yang melakukan hemolisis parsial, di mana hemoglobin dioksidasi menjadi methemoglobin, menghasilkan warna kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenal sebagai hemolisis α atau α-hemolisis dan bakteri diklasifikasikan sebagai α-hemolitik.

Contoh bakteri α-hemolitik adalah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus dari grup viridans.

Akhirnya, ada bakteri yang disebut gamma-hemolytic atau non-hemolytic. Ini tumbuh di agar-agar tanpa menghasilkan perubahan di atasnya, efek yang dikenal sebagai hem -hemolysis, dan mikroorganisme adalah hem -hemolytic.

Contoh bakteri hem -hemolytic: beberapa strain Streptococcus grup D (Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis).

Penggunaan

Media kultur agar darah adalah salah satu yang paling umum digunakan di laboratorium mikrobiologi.

Di antara mikroorganisme yang mampu tumbuh pada media agar darah adalah: ketat, fakultatif, mikroaerofilik, anaerob, bakteri aerob positif-Gram atau negatif, bakteri cepat tumbuh atau tumbuh lambat.

Beberapa bakteri yang menuntut atau mengganggu dari sudut pandang gizi, serta jamur dan ragi, juga tumbuh. Demikian juga, itu berguna untuk subkultur atau mengaktifkan kembali strain yang sangat lemah secara metabolik.

Namun, pilihan golongan darah dan agar dasar akan bervariasi tergantung pada kemungkinan mikroorganisme yang diduga pemulihan dan penggunaan plak (kultur atau antibiogram) yang akan dibuat..

Pilihan golongan darah

Darah dapat berupa domba, kelinci, kuda atau manusia.

Yang paling direkomendasikan adalah darah domba, dengan beberapa pengecualian. Misalnya, untuk mengisolasi spesies Haemophilus, di mana darah yang disarankan adalah kuda atau kelinci, karena darah domba memiliki enzim yang menghambat faktor V.

Yang paling tidak direkomendasikan adalah manusia, namun itu yang paling banyak digunakan, mungkin karena paling mudah didapat. 

Darah harus didefibrinasi, diperoleh tanpa aditif apa pun dan dari hewan yang sehat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor harus diingat:

Jika darah berasal dari individu yang menderita infeksi bakteri, mereka akan memiliki antibodi spesifik. Dalam kondisi ini, pertumbuhan beberapa bakteri kemungkinan akan terhambat.

Jika diperoleh dari bank darah, mengandung sitrat dan ada kemungkinan bakteri tertentu tidak berkembang di hadapannya. Di sisi lain, jika darah berasal dari pasien yang menggunakan antibiotik, pertumbuhan bakteri yang rentan dapat dihambat.

Dan jika darah berasal dari penderita diabetes, kelebihan glukosa mengganggu perkembangan pola hemolisis yang tepat.

Pilihan jenis agar dasar

Basa agar yang digunakan untuk persiapan agar darah bisa sangat luas. Diantaranya adalah: agar nutrisi, agar infus jantung otak, agar kedelai trypticase, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agar Columbia, agar Brucella, agar Campylobacter, dll..

Penggunaan agar darah sesuai dengan media dasar yang digunakan untuk persiapannya

Agar nutrisi

Basis ini adalah yang paling sedikit digunakan, karena di atasnya akan tumbuh bakteri yang tidak banyak menuntut, seperti basil enterik, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, antara lain. Tidak disarankan untuk mengisolasi Streptococcus.

Agar Infus Otak Jantung (BHI)

Ini adalah salah satu yang paling digunakan sebagai dasar agar darah, karena memiliki nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri, termasuk Streptococcus sp dan bakteri penuntut lainnya. Meskipun tidak tepat untuk mengamati pola hemolisis.

Darah domba biasanya digunakan dengan pangkalan ini.

Varian agar darah juga dapat disiapkan, di mana senyawa lain ditambahkan untuk mengisolasi mikroorganisme tertentu. Misalnya, agar infus jantung otak yang dilengkapi dengan darah kelinci, sistin dan glukosa, berfungsi untuk mengisolasi Francisella tularensis.

Padahal, dengan sistin telurium bermanfaat untuk isolasi Corynebacterium diphteriae. Anda dapat menggunakan darah manusia atau domba.

Dengan yang pertama beta-hemolisis akan terlihat seperti halo sempit, sedangkan dengan yang kedua halo akan jauh lebih luas.

Demikian juga, pangkalan ini bersama dengan bacitracin, tepung jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lainnya (IsoVitaleX), digunakan untuk isolasi genus. Haemophilus sp dari sampel pernapasan.

Juga, jika Anda menambahkan kombinasi antibiotik chloramphenicol - gentamicin atau penicillin - streptomycin dengan darah kuda, sangat ideal untuk isolasi jamur patogen yang menuntut, bahkan dengan hasil yang lebih tinggi daripada agar Sabouraud glukosa. Ini sangat berguna dalam isolasi Histoplasma capsulatum.

Kedelai tryptive

Basis ini yang paling direkomendasikan untuk pengamatan yang lebih baik dari pola hemolisis dan kinerja tes diagnostik seperti taksa optoquine dan bacitracin. Ini adalah agar darah klasik yang digunakan secara rutin.

Dengan dasar ini Anda juga dapat menyiapkan agar darah khusus Corynebacterium diphteriae, dengan telurium sistin dan darah domba.

Demikian juga, kombinasi agar ini dengan darah domba ditambah kanamisin-vankomisin sangat ideal untuk pertumbuhan anaerob, terutama Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Basa ini dilengkapi dengan darah yang digunakan untuk melakukan antibiogram mikroorganisme yang menuntut, seperti Streptococcus sp.

Ini juga berguna untuk isolasi bakteri seperti Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Media ini sangat ideal sebagai dasar agar darah ketika genus Neisseria diduga, terutama Neisseria meningitidis, sejak itu N. gonorrhoeae tidak tumbuh pada agar darah.

Ini juga berfungsi untuk melakukan tes kerentanan terhadap Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Basis ini sangat baik untuk penyemaian sampel biopsi lambung yang dicari Helicobacter pylori.

Media disiapkan dengan menambahkan 7% darah domba yang didefibrinasi dengan antibiotik (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B dan cefsulodin) untuk membatasi pertumbuhan jenis bakteri lain yang mungkin ada.

Basa yang sama ini dilengkapi dengan darah manusia atau domba, asam nalidiksat dan colistin berguna untuk mengisolasi Gardnerella vaginalis. Ini juga ideal untuk mengevaluasi kerentanan antimikroba terhadap antibiotik dari mikroorganisme yang sama.

Selain itu, digunakan untuk persiapan agar darah untuk budidaya anaerob, menambahkan aminoglikosida dan vankomisin.

Basis ini memungkinkan kita untuk mengamati pola hemolisis dengan benar.

Agar Brucella

Media ini digunakan sebagai dasar agar darah bersama dengan penambahan vitamin K sangat ideal untuk budidaya bakteri anaerob. Dalam hal ini dianjurkan menggunakan darah domba.

Campylobacter agar

Campylobacter Agar yang dilengkapi dengan 5% darah domba dan 5 antibiotik (cefalotin, amfoterisin B, trimetoprim, polimiksin B dan vankomisin), adalah media yang digunakan untuk mengisolasi Campylobacter jejuni dalam sampel tinja.

Persiapan

Setiap rumah komersial membawa ke belakang paket instruksi untuk menyiapkan satu liter media kultur. Perhitungan yang sesuai dapat dilakukan untuk menyiapkan jumlah yang diinginkan, sesuai dengan agar-agar dasar yang dipilih.

Timbang dan larut

Basa agar datang dehidrasi (bubuk), sehingga harus dilarutkan dalam air suling disesuaikan dengan pH 7,3.

Jumlah yang ditunjukkan oleh agar-agar dasar yang dipilih ditimbang dan dilarutkan dalam jumlah air yang sesuai dalam suatu fiola, kemudian dipanaskan hingga panas sedang dan dicampur dengan gerakan memutar sampai semua bubuk larut..

Sterilkan

Setelah larut, sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 20 menit.

Agregat darah

Saat meninggalkan autoklaf, biarkan fiola mendingin hingga suhu berosilasi antara 40 hingga 50 ° C; adalah suhu yang didukung kulit manusia dan pada saat yang sama agar belum memadat.

Untuk ini, fiola disentuh dengan tangan dan jika panasnya dapat ditoleransi, itu adalah suhu yang ideal untuk menambahkan jumlah darah defibrinasi yang sesuai (50 ml per liter agar). Campur dengan lembut untuk dihomogenisasi.

Bagian agregat darah sangat penting, karena jika dilakukan ketika medianya sangat panas sel-sel darah merah akan pecah dan medium tidak akan berfungsi untuk mengamati hemolisis.

Jika ditambahkan terlalu dingin, benjolan akan terbentuk dan permukaan media tidak akan mulus untuk membuat seruling dengan benar.

Tuang ke dalam cawan Petri

Sajikan dalam cawan petri steril segera setelah dihomogenisasi darah. Sekitar 20 ml dituangkan ke dalam setiap cawan Petri. Prosedur ini dilakukan dalam tudung aliran laminar atau di dekat korek api.

Saat menyajikan agar darah di cawan Petri, tidak ada gelembung udara yang tersisa di permukaan piring. Jika ini terjadi, nyala api pembakar Bunsen dengan cepat melewati piring untuk menghilangkannya..

Pelat dibiarkan mengeras dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) terbalik sampai digunakan. Sebelum menggunakan pelat agar darah harus ditempa (biarkan suhu ruangan) ditaburkan.

Piring yang disiapkan bertahan sekitar 1 minggu.

Referensi

1. Bayona M. Kondisi mikrobiologis untuk budidaya Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
3. "Agar darah." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 10 Des 2018, 14:55 UTC. 27 Des 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A.
5. Pusat Diagnostik Hewan Laboratorium CEDIVET. Guatemala Tersedia di: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..