Agar Sabouraud fondasi, persiapan dan penggunaan



itu Agar Sabouraud, Juga dikenal sebagai Sabouraud dextrose agar, itu adalah media kultur padat, terutama diperkaya untuk isolasi dan pengembangan jamur, seperti ragi, jamur dan dermatofita..

Oleh karena itu, ini berarti tidak boleh kurang di laboratorium mikrobiologi untuk menyelidiki keberadaan jamur patogen atau oportunistik, baik dari sampel klinis atau non-klinis. Demikian juga, ini juga ideal untuk pertumbuhan bakteri berfilamen seperti Streptomyces dan Nocardia. Penggunaannya sangat luas, dapat digunakan pada manusia, hewan, tumbuhan dan industri mikologi.

Media ini dibuat pada tahun 1896 oleh dokter kulit terkenal Raimond Sabouraud, yang menjadi spesialis terkenal di dunia dalam gangguan kulit kepala, terutama disebabkan oleh dermatofita..

Penciptaannya begitu penting sehingga telah digunakan sejak saat itu dan berlanjut hingga hari ini, meskipun dengan beberapa modifikasi.

Meskipun khusus untuk jamur, dalam medium ini bakteri dapat tumbuh, oleh karena itu untuk sampel dengan flora campuran memerlukan pemasukan antibiotik dalam persiapannya dan dengan demikian menghambat pertumbuhan flora bakteri yang mungkin ada.

Pilihan antibiotik harus dibuat dengan hati-hati dan mempertimbangkan jenis jamur yang ingin Anda pulihkan, karena beberapa di antaranya dihambat dengan adanya zat-zat tertentu..

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kombinasi agar Sabouraud dextrose yang paling sering digunakan dengan antibiotik
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Dextrose Sabouraud Agar 
    • 2.2 Sabouraud Dextrose Agar (Modifikasi Emmons)
    • 2.3 Sabouraud dextrose agar (modifikasi Emmons) dengan kloramfenikol
    • 2.4 Agar Dextrose Sabouraud Emmons dengan sikloheksimida
    • 2.5 Dextrose Sabouraud Agar (Emmons) dengan chloramphenicol dan cycloheximide
    • 2.6 Antibiotik lain yang bisa ditambahkan
  • 3 Pertimbangan khusus
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Penggunaan
    • 5.1 Budidaya primer
    • 5.2 Sporulasi
    • 5.3 Konservasi
    • 5.4 Microcultures
    • 5.5 Dalam mikologi manusia
    • 5.6 Mikologi hewan
    • 5.7 Mikologi lingkungan
    • 5.8 Mikologi industri
    • 5.9 Mikologi tanaman
  • 6 Referensi

Yayasan

Sabouraud dextrose agar adalah media yang dalam formulasi aslinya selektif lemah, karena pH asam 5,6 ± 0,2, namun bakteri masih dapat berkembang, terutama dalam inkubasi berkepanjangan.

Media ini mengandung kasein pepton dan jaringan hewan yang dicerna pankreas, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pengembangan mikroorganisme.

Ini juga mengandung konsentrasi glukosa tinggi, yang bertindak sebagai sumber energi, mendukung pertumbuhan jamur daripada bakteri. Semua dicampur dengan agar-agar, komponen yang memberikan konsistensi yang tepat.

Di sisi lain, agar Sabouraud dextrose mungkin selektif jika antibiotik ditambahkan.

Dengan antibiotik itu sangat berguna dalam sampel luka, borok terbuka atau sampel di mana dicurigai kontaminasi bakteri besar.

Kombinasi yang paling banyak digunakan dari agar Sabouraud dextrose dengan antibiotik

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol: ideal untuk memulihkan ragi dan jamur berfilamen.

-Sabouraud agar dengan gentamisin dan kloramfenikol: di media ini tumbuh hampir semua jamur dan ragi berfilamen, dan menghambat sejumlah besar bakteri, termasuk Enterobacteria, Pseudomonas dan Staphylococcus.

-Sabouraud agar dengan cycloheximide: sangat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernapasan, selama kecurigaan adalah jamur dimorfik.

Cycloheximide harus digunakan dengan hati-hati; Meskipun digunakan untuk menghambat pertumbuhan jamur dan ragi non-patogen atau lingkungan yang mungkin hadir sebagai kontaminan dalam sampel, ia juga menghambat pertumbuhan beberapa jamur seperti Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp dan jamur oportunistik lainnya.

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol plus cycloheximide: digunakan terutama untuk mengisolasi dermatofita dan jamur dimorfik. Ini memiliki kelemahan yang menghambat beberapa spesies jamur oportunistik Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes atau C. neoformans.

-Sabouraud agar dengan chloramphenicol, streptomycin, penicillin G dan cycloheximide: sangat ideal untuk sampel yang sangat terkontaminasi bakteri dan jamur saprophytic, tetapi memiliki kelemahan yang menghambat pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, selain jamur oportunistik yang disebutkan di atas.

Persiapan

Jika Anda memiliki bahan-bahan secara terpisah, Anda dapat menyiapkannya dengan cara berikut:

Dextrose agar Sabouraud 

Timbang:

- 40 gr dekstrosa

- 10 g pepton

- 15 gr agar-agar

- Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH diatur ke 5.6. Larutkan zat terlarut dengan mendidih, distribusikan 20 ml media dalam tabung 25 x 150 mm, tanpa flensa dan dengan kapas diutamakan.

Ukuran tabung lainnya juga dapat digunakan, tergantung ketersediaan.

Mereka diautoklaf selama 10 menit pada suasana tekanan (121 ° C). Jangan melebihi waktu autoklaf. Saat meninggalkan autoklaf, tabung dimiringkan dengan penyangga sampai membeku di puncak seruling..

Cara lain adalah melarutkan bahan dengan memanaskan sampai mendidih. Dalam fiola autoclave yang sama selama 10 menit dan kemudian mendistribusikan 20 ml dalam cawan Petri.

Jika media agar Sabouraud dextrose tersedia, yang sudah mengandung semua bahan, kami menimbang jumlah yang ditentukan oleh rumah komersial untuk satu liter air. Langkah-langkah selanjutnya sama dengan yang dijelaskan di atas.

Dextrose agar Sabouraud (modifikasi Emmons)

Timbang:

-  20 gr dekstrosa

- 10 g pepton

-  17 gr agar-agar

-  Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH disesuaikan menjadi 6,9. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti pada kasus sebelumnya.

Ada rumah komersial yang menawarkan medium dengan semua bahan. Dalam hal ini, timbang dan siapkan seperti yang dijelaskan dalam sisipan.

Sabouraud dextrose agar (modifikasi Emmons) dengan chloramphenicol

Larutan stok Chloramphenicol

- Timbang 500 mg basa kloramfenikol

- Ukur 100 ml etanol 95%

- Campur

Media agar Sabouraud dextrose agar (Emmons) dibuat seperti dijelaskan di atas dan, tambahan, untuk setiap liter media, tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol sebelum diautoklaf..

Dextrose agar Sabouraud Emmons dengan cycloheximide

Solusi stok Cycloheximide

- Timbang 5 gr cycloheximide

- Ukur 100 ml aseton

- Campur

Media agar Sabouraud dextrose agar (Emmons) dibuat sebagaimana telah dijelaskan dan tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan chloramphenicol dan cycloheximide

Media agar Sabouraud dextrose agar (Emmons) dibuat seperti dijelaskan di atas dan tambahan untuk setiap liter media tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol dan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum diautoklaf.

Antibiotik lain yang bisa ditambahkan

20.000 hingga 60.000 unit penisilin per liter media.

30 mg streptomisin per liter media.

Keduanya harus dimasukkan setelah autoklaf medium, sedikit dingin (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter media.

0,04 g gentamisin per liter media.

Pertimbangan khusus

Untuk keamanan, lebih disukai menanam agar Sabouraud dextrose dalam tabung berbentuk baji (cenderung pada puncak seruling) daripada di cawan Petri, untuk menghindari dispersi dan inhalasi spora..

Adalah penting bahwa tabung dengan agar Sabouraud ditutup dengan kapas dan tidak dengan penutup ulir, karena telah ditunjukkan bahwa kondisi semianaerob menghambat pembentukan spora di beberapa galur, misalnya Coccidioides immitis. Selain itu, sebagian besar jamur bersifat aerob.

Jika menggunakan tutup sekrup, jangan tutup rapat.

Kontrol kualitas

Media yang disiapkan harus memiliki kontrol kualitas untuk memverifikasi fungsinya yang tepat. Untuk tujuan ini, galur kontrol tertentu ditanam.

Untuk agar Sabouraud dextrose agar dengan turunan kloramfenikol ATCC dapat digunakan. Candida albicans, yang harus memiliki pertumbuhan yang sangat baik. Piring lain diinokulasi dengan strain dari Escherichia coli, harus sepenuhnya dihambat.

Pelat yang tidak diinokulasi diinkubasi di mana tidak ada mikroorganisme yang tumbuh.

Agar Sabouraud dextrose dengan kloramfenikol dan sikloheksimida dapat digunakan sebagai strain  Trichophyton mentagrophytes, harus berkembang dengan baik. Piring lain diinokulasi dengan strain Aspergillus flavus, di mana harus ada pertumbuhan kecil atau tidak ada pertumbuhan. Selain itu, plat yang tidak diinokulasi diinkubasi untuk menunjukkan sterilitasnya.

Untuk Sabouraud dextrose agar dengan cycloheximide, strain Candida albicans, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, yang harus menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Demikian juga dengan strain Aspergillus flavus, menunjukkan sedikit pertumbuhan atau tidak ada pertumbuhan. Terakhir, inkubasi plat yang tidak diinokulasi untuk kontrol sterilitas.

Penggunaan

Budidaya primer

Agar Sabouraud dekstrosa klasik mengandung 4 gram dekstrosa dan sangat baik sebagai media isolasi primer, karena menunjukkan karakteristik morfologi masing-masing jamur.

Juga sangat baik untuk menunjukkan produksi pigmen. Namun, itu bukan cara yang paling tepat untuk mengamati sporulasi.

Juga tidak disarankan untuk tumbuh Blastomyces dermatitidis, yang dihambat oleh tingginya konsentrasi glukosa.

Di sisi lain, pertimbangan tertentu harus diingat untuk kultivasi.

Beberapa jamur berkembang lebih baik pada suhu kamar, seperti jamur, yang lain berkembang dengan sukses pada suhu 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan yang lainnya dapat berkembang pada kedua suhu (jamur dimorfik).

Untuk alasan ini, kadang-kadang perlu menggunakan beberapa pelat agar Sabouraud untuk sampel yang sama, karena mereka sering ditanam dalam rangkap dua untuk menginkubasi satu piring pada suhu kamar dan piring lain pada suhu 37 ° C..

Sebagai contoh, Sporothrix schenckii ditaburkan di dua piring; satu diinkubasi pada suhu kamar untuk mendapatkan fase cetakan dan yang lainnya diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk mendapatkan fase seperti ragi, tetapi pada yang terakhir perlu menambahkan 5% darah ke media.

Dalam kasus lain, seperti dalam sampel misetoma, dua piring agar Sabouraud ditabur, satu dengan kloramfenikol dan yang lainnya dengan cycloheximide. Yang pertama akan memungkinkan pertumbuhan agen penyebab misetoma yang berasal dari jamur (Eumicetoma) dan agen penyebab kedua dari misetoma yang berasal dari bakteri, seperti actinomycetoma..

Sporulasi

Agar dekstrosa Sabouraud dimodifikasi oleh Emmons mengandung 2 gram dekstrosa dan tidak hanya digunakan untuk isolasi, tetapi juga untuk sporulasi dan konservasi jamur.

Dalam media ini jika Anda dapat memulihkan strain Blastomyces dermatitidis.

Konservasi

Untuk melestarikan kultur jamur dapat disimpan dalam lemari es (2-8 ° C). Waktu penyimpanan dapat bervariasi antara 2 hingga 8 minggu. Setelah waktu ini, mereka harus disubkultur untuk mengulangi prosesnya.

Beberapa jamur paling baik dipertahankan pada suhu kamar, seperti Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum dan Microsporum audounii.

Pemeliharaan strain dapat diperpanjang untuk menghindari pleomorfisme jika dekstrosa dikeluarkan sepenuhnya dari agar-agar dan jika jumlah agar-agar dalam medium dikurangi untuk menghindari kekeringan..

Microcultures

Untuk identifikasi beberapa jamur berfilamen, perlu dilakukan mikrokultur menggunakan agar Sabouraud atau sarana khusus lainnya untuk mengamati struktur reproduksi seksual dan aseksual..

Dalam mikologi manusia

Ini digunakan terutama untuk diagnosis penyakit jamur, terutama yang mempengaruhi kulit dan keterikatannya (rambut dan kuku).

Sampel dapat berupa sekresi, eksudat, kulit, rambut, kuku, dahak, CSF atau urin. Patogen yang biasanya diisolasi adalah dermatofita, jamur yang menyebabkan infeksi jamur subkutan dan sistemik.

Mikologi hewan

Hewan sering terpengaruh oleh infeksi jamur, jadi agar Sabouraud berguna pada hewan seperti pada mikologi manusia..

Misalnya, dermatofita sering kali dapat menyerang hewan. Demikianlah halnya dengan Microsporum canis var distortum, yang sering menginfeksi anjing, kucing, kuda, babi, dan monyet. Demikian juga, Microsporum gypseum menginfeksi anjing, kucing, dan ternak.

Burung seperti ayam, ayam jantan dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.

Jamur lainnya, seperti Zymonema farciminosum, mereka juga merupakan penyebab penyakit pada hewan, terutama pada kuda, bagal dan keledai, menghasilkan peradangan penting dalam pembuluh limfatik.

Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum mempengaruhi hewan peliharaan dan manusia.

Mikologi lingkungan

Banyak jamur patogen atau oportunistik dapat terkonsentrasi pada waktu tertentu di lingkungan tertentu, terutama di ruang operasi dan Unit Perawatan Intensif (ICU) dari klinik dan rumah sakit. Karena itu, perlu untuk mengendalikan mereka.

Ruang rentan lainnya adalah perpustakaan dan bangunan tua, yang dapat dipengaruhi oleh konsentrasi jamur lingkungan.

Dalam studi lingkungan Sabouraud dextrose agar digunakan untuk isolasi jamur.

Mikologi industri

Agar Sabouraud dextrose agar tidak dapat hilang untuk studi kontaminan jamur dalam produksi kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, antara lain.

Mikologi tanaman

Tumbuhan ini juga menderita penyakit yang disebabkan oleh jamur, mempengaruhi bagian-bagian berbeda dari tanaman, yang bahkan dapat mengakhiri panen, menyebabkan kerugian besar di bidang pertanian.

Referensi

  1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Diagnosis mikrobiologis dari mikosis dan studi sensitivitas terhadap antijamur. Rekomendasi dari Masyarakat Spanyol untuk Penyakit Menular dan Mikrobiologi Klinik. Tersedia di: coesant-seimc.org
  2. Laboratorium ValteK. (2009). Sabouraud dextrose agar dengan cycloheximide. Tersedia di: andinamedica.com.
  3. Navarro O. (2013). Mikologi hewan. Universitas Agraria Nasional. Nikaragua.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologis dari Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A
  5. Casas-Rincon G. General Mycology. 1994. Edisi ke-2 Universidad Central de Venezuela, edisi Perpustakaan. Venezuela, Caracas.