Yayasan Papa dekstrosa, persiapan dan penggunaan



itu agar-agar dekstrosa ini adalah media kultur bergizi yang solid dan tidak selektif. Itu dapat tumbuh spesies bakteri dan jamur, tetapi penggunaannya diindikasikan terutama untuk isolasi jamur dan ragi berfilamen. Ia juga dikenal sebagai media PDA oleh ungkapan bahasa Inggris Potato Dextrose Agar.

Ini sangat berguna untuk isolasi jamur fitopatogenik, yaitu yang mempengaruhi tanaman. Untuk menanam sampel dari tanaman yang terinfeksi, media lain seperti agar Sabouraud atau malta agar dapat digunakan, namun, untuk penggunaan rutin, agar kentang dekstrosa lebih disukai karena sporulasi yang lebih besar..

Ini juga digunakan untuk menghitung koloni jamur dalam sampel kosmetik, farmasi dan beberapa makanan susu. Demikian juga, adalah layak untuk menanam sampel kerokan kulit untuk mencari dermatofita, yang tumbuh sangat baik di media ini, mengembangkan pigmen karakteristik mereka.

Media kentang dekstrosa adalah sangat sederhana dan mudah disiapkan di laboratorium. Ini berisi, seperti namanya, infus kentang, dekstrosa dan agar-agar. Selain itu zat penghambat dapat ditambahkan untuk mencegah pertumbuhan bakteri dan meningkatkan selektivitas untuk spesies jamur.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 - Persiapan agar-agar papa dextrose buatan sendiri (non-komersial)
    • 2.2 - Persiapan komersial agar papa dextrose
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Proses untuk menanam sampel tanaman pada agar kentang dekstrosa
    • 3.2 Proses untuk menanam sampel sisik kulit, rambut atau kuku pada agar-agar dextrose
    • 3.3 Prosedur identifikasi
    • 3.4 Jumlah koloni
    • 3.5 Pemeliharaan strain jamur
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Papa dextrose agar adalah media kultur yang menyediakan elemen nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan jamur dan ragi berfilamen.

Kombinasi infus kentang dengan glukosa menyediakan sumber energi yang sempurna untuk pertumbuhan jamur yang memuaskan. Sedangkan agar adalah yang memberikan konsistensi pada lingkungan.

Media itu sendiri tidak menghambat pertumbuhan bakteri, jadi itu adalah media yang tidak selektif. Untuk membuatnya selektif Anda membutuhkan penambahan zat penghambat seperti asam tartarat atau antibiotik.

Persiapan

-Persiapan agar-agar dextrose kentang buatan sendiri (non-komersial)

Piring Petri

Itu disiapkan dengan cara berikut:

Pertama-tama, kentang dicuci dengan sangat baik, menghilangkan kotoran yang mereka miliki. Mereka dipotong menjadi irisan tipis dengan segalanya dan cangkang. 200 g kentang ditimbang dan ditempatkan hingga mendidih dalam satu liter air suling selama setengah jam.

Setelah itu saring atau saring semua persiapan melalui kain kasa.

Cairan yang diperoleh dilengkapi dengan air suling sampai mencapai satu liter. Ke infus, 20 g agar-agar dan 20 g dekstrosa ditambahkan, dicampur dengan baik dan diautoklaf pada 121 ° C, pada 15 pon tekanan selama 15 menit.

Biarkan dingin hingga 50 ° C dan sajikan dalam cawan Petri yang steril. Piring yang disiapkan disimpan dalam lemari es.

Wedges

Anda juga bisa menyiapkan papa dextrose agar wedges.

Dalam hal ini, sebelum sterilisasi dalam autoklaf, 12 sampai 15 ml media ditempatkan dalam tabung, kemudian diautoklaf dan dibiarkan di atas penyangga khusus sampai mengeras. Simpan di lemari es.

Media tetap pada pH 5,6 ± 0,2, namun, beberapa laboratorium menambahkan asam tartarat 10% untuk menurunkan pH menjadi 3,1 ± 0,1 untuk menghambat pertumbuhan bakteri.

Dalam pengertian yang sama, laboratorium lain lebih suka menambahkan antibiotik untuk membuatnya selektif untuk budidaya jamur dan mencegah perkembangan bakteri.

-Persiapan komersial agar kentang dekstrosa

Timbang 39 g media dehidrasi yang tersedia secara komersial dan larut dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit.

Campuran dipanaskan dengan mengaduk sering sampai total disolusi. Selanjutnya disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Piring atau irisan dapat disiapkan. Lanjutkan seperti dijelaskan di atas.

PH tetap di 5,6 ± 0,2. Jika pH 3,1 diinginkan, 14 ml asam tartarat steril 20% harus ditambahkan sebelum disajikan di atas piring..

Warna medium yang tidak siap berwarna krem ​​dan disiapkan berwarna kuning muda dengan penampilan agak keruh atau berpadu.

Penggunaan

Proses untuk menanam sampel tanaman dalam agar kentang dekstrosa

-Untuk daun dengan flek

Daunnya dipotong-potong.

Dalam gelas 50cc dengan alkohol 50%, letakkan potongan daun (potongan bernoda dan sehat), untuk mendisinfeksi permukaan selama 20 hingga 30 detik. Tarik alkohol dan tambahkan 20% natrium hipoklorit selama 40 hingga 50 detik jika daunnya tipis dan tingkatkan waktu menjadi 80 detik jika itu adalah kulit kayu dan kayu gelondongan..

Tarik natrium hipoklorit dan ambil dengan klip steril potongan yang didesinfeksi dan letakkan di permukaan media (maksimal 10 buah). Tempatkan tanggal dan inkubasi dari 20 hingga 30 ° C.

-Untuk buah-buahan dan umbi-umbian

Jika buahnya berdaging, buka buah yang terkena jamur dan ambil potongan dengan pisau bedah steril, bagian yang sakit dan bagian yang sehat dan letakkan di permukaan agar-agar..

Jika buahnya jeruk, seperti lemon atau jeruk, Anda harus membuka dan menabur benih Anda.

Ketika permukaan buah terpengaruh dan spora diamati, yang terbaik adalah menggunakan metode parut di piring; ini terdiri dari menyentuh spora dengan spatula dalam bentuk "L" yang disterilkan dan didinginkan, dan kemudian melakukan penyemaian zig-zag 2 hingga 3 kali pada agar-agar..

-Untuk biji-bijian

Mereka didesinfeksi seperti dijelaskan dalam daun dan kemudian ditempatkan pada agar-agar.

-Untuk cabang dan batang

Pengikisan kulit dilakukan dan kemudian bagian yang sehat dan sakit diambil dan ditaburkan langsung pada agar-agar..

Lempeng yang ditabur diinkubasi dalam aerobiosis pada 20-30 ° C selama 72 jam.

Proses untuk menanam sampel sisik kulit, rambut, atau kuku pada agar papa dextrose

Sampel harus diambil dengan menggunakan pisau bedah No. 11, baik untuk memotong rambut yang terkena, serpihan kulit atau kuku untuk mencari dermatofita. Sebelum mengambil sampel, area tersebut harus didesinfeksi dengan alkohol 70%.

-Sampel kulit

Pada lesi bersisik tepi lesi harus dikerok, karena ada kemungkinan lebih besar untuk menemukan jamur.

Pada lesi eksudatif sampel diambil dengan swab kering atau basah. Tabur segera pada agar kentang dekstrosa atau agar Sabouraud. Hindari alat transportasi.

Metode pengambilan sampel lainnya adalah melalui teknik karpet persegi Mariat dan Adan Campos. Dalam hal ini daerah yang terkena digosok 5 kali dengan wol steril untuk penanaman lebih lanjut.

Sampel dapat ditempatkan langsung di media kultur.

-Sampel rambut

Tergantung pada patologinya, bagian yang terkena mungkin terpotong atau robek oleh akarnya. Tempatkan sampel dalam media kultur.

-Sampel kuku

Anda dapat mengikis atau memotong bagian tertentu dari kuku yang sakit. Itu akan tergantung pada jenis cedera.

Potong sampel menjadi 1 mm sebelum ditabur untuk meningkatkan kemungkinan kontak jamur dengan media kultur.

Prosedur identifikasi

Koloni yang diperoleh di piring diisolasi dalam tabung yang berisi agar kentang dekstrosa untuk melakukan studi makroskopis koloni (penampilan, warna, konsistensi, tingkat perkembangan)..

Studi mikroskopis (pengamatan struktur dan formasinya), dapat dilakukan dengan mikrokultur atau pengamatan langsung di bawah mikroskop antara lamina dan lamella..

Jumlah koloni

Media ini juga dapat digunakan untuk menentukan beban jamur dan ragi yang ada dalam sampel tanaman, makanan, kosmetik atau obat-obatan. Untuk tujuan ini, papa dextrose agar yang dilengkapi dengan antibiotik digunakan, seperti: (kloramfenikol, klorotetrasiklin atau keduanya).

Tuang 1 ml sampel - lebih disukai diencerkan - ke dalam cawan petri steril dan kosong, kemudian lelehkan steker agar kentang dekstrosa dan biarkan dingin hingga 45 ° C. Tuang di atas cawan petri dan putar hingga homogen. Biarkan diam sampai mengeras.

Inkubasi dalam aerobiosis pada 20-25 ° C (cetakan) atau pada 30-32 ° C (ragi) selama 5 hingga 7 hari atau lebih, tergantung pada jenis jamur yang dicari dan jenis sampel. Dua pelat dapat digunakan untuk menetaskan di kedua rentang suhu.

Pemeliharaan strain jamur

Agar Papa dekstrosa dapat digunakan untuk mempertahankan strain jamur yang hidup selama beberapa tahun.

Untuk melakukan ini, jamur dibudidayakan di papa dextrose agar wedges dan setelah jamur ditanam, ditutupi dengan minyak mineral. Minyak harus disterilkan dalam autoklaf selama 45 menit, dan memiliki viskositas perkiraan 300 hingga 330 Saybolt. Minyak harus melebihi ujung bevel sebanyak 1 hingga 2 cm.

Kontrol kualitas

Dari setiap batch yang disiapkan, satu atau dua piring harus diambil dan diinkubasi pada 25 ° C selama 48 jam atau pada 20 ° C selama 96 jam. Kontrol sterilitas yang baik adalah kontrol di mana tidak ada perkembangan koloni.

Galur kontrol yang dikenal atau disertifikasi seperti:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Dalam semua kasus, pertumbuhan yang baik diharapkan.

Referensi

  1. Laboratorium Britania. Agar Papa glucosado. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  2. Laboratorium Neogen Agar kentang Dextrose. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  3. Laboratorium Insumolab Agar kentang dekstrosa. Tersedia di: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincon G. General Mycology. 1994. Edisi ke-2 Universidad Central de Venezuela, edisi Perpustakaan. Venezuela, Caracas.
  6. Aceituno M. Evaluasi Kualitas Mikrobiologis di Eyeshadow, Jenis Serbuk Compact dari Laboratorium Produksi Nasional, menurut Metode Referensi Usp Farmakopeia 2005. Tesis untuk memenuhi syarat untuk judul Kimiawan Farmasi. Universitas San Carlos de Guatemala.
  7. Cuétara M. Pemrosesan sampel permukaan. Majalah Mycology Iberoamerican. 2007; hlm. 1-12