Yayasan, persiapan, dan penggunaan Agar Müeller Hinton



itu Agar Müeller Hinton Ini adalah padat, medium nutrisi non-selektif, yang terdiri dari infus daging, pepton asam kasein, pati, agar dan air suling. Media ini memungkinkan pengembangan mikroba yang sangat baik dari bakteri yang tumbuh paling cepat.

Awalnya dibuat oleh John Howard Müeller dan Jane Hinton untuk mengisolasi bakteri yang membutuhkan nutrisi, seperti Neisseria gonorrhoeae dan Neisseria meningitidis. Namun, karena karakteristiknya itu ternyata ideal untuk studi kerentanan terhadap antibiotik, memberikan hasil yang andal dan dapat direproduksi..

Untuk alasan ini, agar Müeller Hinton adalah media kultur yang diterima oleh Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) dan Komite Eropa untuk Pengujian Kerentanan Antimikroba, untuk pelaksanaan uji kerentanan antimikroba dengan metode difusi cakram Kirby. Bauer.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Teknik antimikroba
    • 3.2 Penempatan cakram yang strategis pada agar Müeller Hinton
  • 4 Penyebab hasil yang salah
  • 5 Batasan
  • 6 Kontrol kualitas
  • 7 Referensi

Yayasan

Karena merupakan media nutrisi non-selektif, ia sangat baik untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri patogen.

Di sisi lain, komposisi yang sederhana membuat zat mudah berdifusi di atasnya, menjadi karakteristik penting untuk uji kerentanan dengan metode difusi disk..

Karakteristik lainnya adalah mengandung jumlah inhibitor yang rendah, yang memungkinkan sulfonamid, trimetoprim dan tetrasiklin dievaluasi secara efektif..

Namun, harus diingat bahwa medium harus memenuhi kondisi tertentu untuk memastikan fungsinya yang tepat, termasuk:

Penyesuaian PH, kedalaman agar dan konsentrasi timin, timidin, Ca++, Mg++ dan Zn++.

Kita juga harus tahu bahwa metodologi ini distandarisasi dan oleh karena itu semua parameter harus dipenuhi, seperti:

Konsentrasi inokulum, konsentrasi dan pengawetan cakram antibiotik, penempatan jumlah cakram yang sesuai pada agar, jarak antara satu cakram dan yang lain, penempatan strategis antibiotik tertentu, atmosfer, suhu dan waktu inkubasi.

Persiapan

Timbang 37 gr medium Müeller Hinton yang didehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan medium sambil diaduk untuk membantu melarutkannya. Biarkan mendidih selama 1 menit.

Ambil autoklaf untuk disterilkan pada 121 ° C selama 15 menit. Saat melepas dari autoclave, fiola harus ditempatkan dalam bak air pada suhu 50 ° C untuk mendinginkan. Tuang 25 hingga 30 ml ke dalam cawan Petri steril berdiameter 10 cm.

Pelat harus memiliki ketebalan rata-rata 4 mm (ideal), dengan kisaran 3-5 mm diizinkan.

Jika seseorang ingin mempersiapkan dasar agar darah menggunakan Mueller Hinton agar, menuangkan darah domba 5% steril dan defibrinated sebelum disajikan piring.

PH akhir medium harus antara 7,2 hingga 7,4.

Investasikan dan simpan di lemari es, sampai digunakan. Biarkan piring mengambil suhu ruangan sebelum digunakan.

Warna media yang disiapkan adalah krem ​​ringan.

Penggunaan

Ini digunakan untuk melakukan tes antibiogram atau kerentanan antibiotik terhadap sebagian besar patogen yang tidak tumbuh cepat.

Jika agar ditambah dengan darah, agar berfungsi untuk melakukan antibiogram mikroorganisme yang menuntut seperti: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, antara lain. Itu juga telah digunakan untuk mengisolasi Legionella pneumophila.

Teknik antibiogram

Sebelum melakukan antibiogram, larutan bakteri yang setara dengan 1,5 x 10 harus disiapkan8 sel.

Untuk melakukan ini, 3 hingga 4 koloni diambil dari kultur murni dan disuspensikan dalam kaldu kedelai tripticase atau dalam kaldu Müeller Hinton, diinkubasi selama 2 hingga 6 jam dan konsentrasinya disesuaikan dengan salin steril, membandingkannya dengan standar Mac Farland. 0,5%.

Jika mereka menuntut mikroorganisme, koloni dapat ditangguhkan secara langsung hingga mencapai konsentrasi 0,5% dari Mac Farland. Selanjutnya, piring Müeller Hinton ditaburkan dengan kapas yang diresapi dengan larutan bakteri yang disiapkan.

Untuk melakukan ini, celupkan swab ke dalam larutan dan kemudian keluarkan cairan berlebih dengan menekan dinding tabung. Segera setelah swab melewati seluruh permukaan, tidak meninggalkan tempat yang tidak tersentuh, kemudian sedikit memutar piring dan menabur kembali. Operasi diulangi 2 kali lagi.

Diamkan selama 10 menit dan kemudian letakkan cakram antibiotik dengan tang yang steril, sisakan jarak 24 mm di antaranya. Setelah menempatkan setiap disk pada agar-agar, tekan perlahan masing-masing dengan penjepit untuk memastikan bahwa mereka melekat dengan baik.

Setelah proses, piring dibalik dan diinkubasi pada suhu 35-37 ° C dalam aerobiosis selama 16 hingga 18 jam. Jika ini adalah mikroorganisme yang banyak, mungkin memerlukan mikroaerofilia dan jika antibiogramnya mengandung cakram oksasilin harus dibaca pada 24 jam.

Penggaris digunakan untuk mengukur diameter setiap halo. Hasilnya harus dicatat dalam mm. Selanjutnya, nilai-nilai yang diperoleh berkorelasi dengan tabel titik potong yang diterbitkan oleh manual CLSI saat ini.

Laporkan sebagai sensitif (S), menengah (I), atau resisten (R), tergantung pada masalahnya.

Antibiotik dipilih sesuai dengan mikroorganisme yang terisolasi dan jenis infeksi yang terjadi.

Kadang-kadang penempatan antibiotik yang strategis harus dipertimbangkan untuk menunjukkan pola resistensi fenotipik.

Penempatan cakram yang strategis pada agar Müeller Hinton

Untuk enterobacteria, cakram asam klavulanat harus diletakkan di depan sefalosporin generasi ke-3 dan ke-4. Pelebaran berbentuk telur menunjukkan bahwa strain tersebut merupakan produsen beta-laktamase spektrum-diperluas (ESBL). Ini berarti bahwa pasien tidak boleh diobati dengan sefalosporin.

Dalam Staphylococcus, penting untuk menempatkan disk eritromisin atau azitromisin di depan disk klindamisin (uji-D).

Tahan eritromisin halo dan halo merata klindamisin menunjukkan bahwa strain memiliki ketahanan terhadap klindamisin ketegangan diinduksi (RIC). Ini berarti bahwa pengobatan dengan klindamisin tidak efektif.

Untuk mencari strain AMP C yang dapat diinduksi di Enterobacteriaceae dan beberapa basil negatif Gram, cakram ceftazidime, cefoxitin atau piperacillin tazobactan dihadapkan dengan cakram imipenem, pada jarak 27 mm.

Lingkaran halo yang rata pada salah satu cakram yang menghadap ke imipenem menunjukkan adanya AMP C yang diinduksi.

Mencari konstitutif AMP C disc cloxacillin 500 pg dengan ceftazidime (30 mg) dan cefotaxime (30 mg), pada jarak 25 wajah mm. Sebuah halo melebar di beberapa sefalosporin menunjukkan positif.

juga dapat mengganti disk oleh cloxacillin disc 9 mm Whatman No 6 diresapi dengan asam fenil boronic (400 mg) dengan jarak 18 mm. Hal ini diartikan sebagai sebelumnya.

Akhirnya, untuk menyelidiki produksi metallo-beta-laktamase, terutama di Pseudomonas aeruginosa, disk yang diresapi dengan 10 μl asam etilenadiaminetetraasetat (EDTA 750 ug) dan asam tioglikolat (SMA 300 ug), yang menghadap disk imipenem dan meropenem, digunakan pada jarak 15 mm.

Tes ini positif jika ada pelebaran imipenem atau meropenem halo ke disk EDTA / SMA. Hasil ini harus dikonfirmasi oleh uji Hodge yang dimodifikasi.

Metode ini terdiri dari inokulasi strain Escherichia coli ATCC 25922 di piring Müeller Hinton. Cakram imipenem ditempatkan di tengah piring dan kemudian seruling dibuat dari cakram itu menuju pinggiran dengan galur P. aeruginosa tersangka Anda dapat menguji hingga 4 strain per piring.

Tes akan positif jika ada zona distorsi halo imipenem di sekitar stria.

Penyebab hasil yang salah

-Cakram antibiotik yang tidak dirawat dengan baik dapat menghasilkan resistensi palsu. Sebagai contoh, disc oxacillin sangat rentan terhadap perubahan suhu.

-PH medium di bawah yang ditunjukkan (asam) menghasilkan halo yang lebih kecil dalam aminoglikosida dan makrolida (risiko resistensi palsu), dan halo yang lebih besar dalam penisilin, tetrasiklin, dan novobiocin (risiko kepekaan salah).

-Jika pH di atas ditunjukkan (basa) efek yang dijelaskan di atas terbalik.

-Media dengan konsentrasi timin dan timidin yang tinggi mempengaruhi penurunan halo sulfonamida dan trimetoprim secara signifikan..

-Konsentrasi tinggi kalsium dan magnesium menghasilkan resistensi palsu dari aminoglikosida, polimiksin B dan tetrasiklin terhadap strain Pseudomonas aeruginosa.

-Konsentrasi kalsium dan magnesium yang rendah menghasilkan sensitivitas palsu aminoglikosida, polimiksin B dan tetrasiklin terhadap strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kehadiran seng mempengaruhi hasil cakram karbapenem (imipenem, meropenem dan ertapenem).

-Ketebalan media di bawah 3 mm menghasilkan hasil sensitivitas palsu, sedangkan ketebalan di atas 5 akan menghasilkan resistensi palsu.

-Mobilisasi cakram dalam antibiogram akan memberikan lingkaran cahaya yang cacat, karena pelepasan antibiotik terjadi segera.

- Inokulum lemah mempengaruhi hasil, karena akan ada seragam atau berkumpul di agar-agar, diperlukan untuk mengukur penghambatan kondisi lingkaran cahaya, selain lingkaran cahaya pertumbuhan dapat memberikan yang lebih besar dari normal.

-Inokula yang kelebihan beban bisa menghasilkan halo yang lebih kecil dari biasanya.

-Tidak menghormati jarak antara disk menyebabkan satu halo tumpang tindih dengan yang lain dan tidak dapat dibaca dengan benar.

-Inkubasi dengan CO2 meningkatkan ukuran lingkaran cahaya tetrasiklin dan disk metisilin.

-Inkubasi pada suhu di bawah 35 ° C menghasilkan halo yang lebih besar.

-Penambahan darah mengurangi ukuran halo dari sulfonamida.

Batasan

Sensitivitas antibiotik ditunjukkan dalam antibiogram terhadap mikroorganisme (in vitro) bukan jaminan bahwa itu akan berhasil in vivo.

Kontrol kualitas

Untuk mengetahui apakah medianya mengandung jumlah timin yang tepat, strain harus ditaburkan dari Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan menguji kerentanan terhadap trimetoprim sulfametoksazol (SXT), harus memberikan halo yang sama atau> 20 mm untuk memuaskan.

Referensi

  1. "Agar Müller-Hinton." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 16 Nov 2018, 12:23 UTC. 27 Jan 2019, 04:22
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Cona E. Kondisi untuk studi kerentanan yang baik dengan uji difusi agar. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
  4. Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Müeller Hinton dengan darah domba 5%. 2009. Tersedia di: http://f-soria.es
  5. Laboratorium BD Müeller Hinton II Agar. 2017. Tersedia di: .bd.com
  6. Laboratorium Britania. Agar Müeller Hinton. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas tipe AmpC: Umum dan metode untuk deteksi fenotipik. Pendeta Soc. Ven. Mikrobiol. 2009; 29 (2): 78-83. Tersedia di: scielo.org.
  9. Perozo A, Castellano M, Ling E, deteksi Areniz N. Phenotypic dari metallobetalactamases pada isolat klinis Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121. Tersedia di: scielo.org.