Yayasan Agar M.R.S, persiapan dan penggunaan



itu agar M.R.S. adalah media kultur padat selektif, digunakan untuk isolasi dan penghitungan bakteri asam laktat, terutama dari genus Lactobacillus. Agar ini dibuat pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, bagian tengahnya memakai nama yang sama, tetapi karena kerumitannya, singkatan M.R.S sering digunakan..

Ini terdiri dari proteose pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi, glukosa, sorbitan monoleat, dipotassium fosfat, natrium asetat, amonium sitrat, magnesium sulfat, mangan sulfat dan agar..

Komposisi ini memungkinkan pengembangan bakteri asam laktat dari sampel klinis, seperti feses, sekresi vagina, sampel oral dan ASI, serta makanan susu dan daging..

Ini tidak digunakan secara rutin di laboratorium klinis, karena bakteri asam laktat jarang terlibat dalam proses patologis. Namun, penggunaan agar M.R.S lebih sering di bidang mikrobiologi makanan..

Di sisi lain, media ini digunakan oleh beberapa Pusat Penelitian yang tujuannya adalah mempelajari bakteri asam laktat.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Karakteristik koloni
    • 3.2 Isolasi bakteri asam laktat
    • 3.3 Menghitung bakteri asam laktat
    • 3.4 Di tingkat Penelitian
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Sang Agar, Rogosa dan Sharpe memiliki komposisi yang cukup kompleks. Dengan memecah fungsi yang memenuhi masing-masing komponennya, fondasinya dapat dijelaskan.

Proteo pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa adalah nutrisi yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Selain itu, glukosa adalah sumber energi universal yang digunakan di sebagian besar media kultur.

Di sisi lain, untuk mendukung pertumbuhan bakteri asam laktat, keberadaan kofaktor (kation) yang sangat diperlukan dalam metabolisme Lactobacillus dan bakteri terkait diperlukan; Senyawa ini adalah garam natrium, magnesium, dan mangan.

Demikian juga, sorbitan monoleat atau polisorbat 80 adalah sumber asam lemak penting ketika diserap sebagai nutrisi.

Selain itu, sorbitan monoleat dan amonium sitrat bertindak dengan menghambat perkembangan flora yang menyertainya, terutama bakteri Gram-negatif, memberikan karakter selektif agar ini..

Akhirnya, agar-agar adalah yang memberikan konsistensi padat pada medium.

Ada varian lain agar Man Rogosa Sharpe; salah satunya adalah yang dilengkapi dengan sistein (M.R.S.c), sangat berguna untuk isolasi bifidobacteria, di antara mikroorganisme lainnya. Di sisi lain, ada media MRS yang dilengkapi dengan neomisin, paromomisin, asam nalidiksat dan litium klorida, terutama untuk penghitungan selektif bifidobacteria dalam produk susu.

Persiapan

Timbang 68,25 gram media kering dan larutkan dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit. Untuk melarutkannya secara keseluruhan, bawa ke sumber panas yang sering diaduk dan biarkan mendidih selama 1 hingga 2 menit. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Saat meninggalkan autoclave diamkan beberapa menit dan distribusikan masih panas dalam cawan petri steril.

Biarkan memadatkan dan membalikkan pelat, pesan dengan plakat dan simpan di lemari es sampai digunakan. Biarkan piring untuk mengambil suhu ruangan sebelum menggunakannya.

PH medium harus 6,4 ± 0,2. Beberapa rumah komersial merekomendasikan pH antara 5,5 hingga 5,9.

Media yang didehidrasi berwarna krem ​​dan disiapkan berwarna kuning gelap.

Baik media dehidrasi dan pelat yang disiapkan harus disimpan pada 2 hingga 8 ° C.

Penggunaan

Agar-agar piring M.R.S. mereka dapat ditaburkan di permukaan (kelelahan atau dengan spatula Drigalski). Ini juga bisa ditaburkan secara mendalam. Pelat harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilik (4% O2 dan 5-10% CO2) selama 24 hingga 72 jam.

Metode penyemaian dipilih sesuai dengan tujuan yang ditempuh (isolasi atau penghitungan).

Karakteristik koloni

Koloni dugaan Lactobacillus tumbuh keputihan dan memiliki penampilan berlendir atau krim pada agar-agar ini. Maka mereka harus mengidentifikasi.

Isolasi bakteri asam laktat

Untuk tujuan ini, penanaman di permukaan digunakan. Sampel yang akan ditanam memerlukan prosedur sebelumnya. 

Dalam hal sampel ASI, direkomendasikan untuk centrifuge 1 ml sampel pada 14.000 rmp selama 10 menit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 μl dibuang, dan dalam 100 μl sisanya sedimen ditangguhkan dan dituangkan ke M.R.S. Maka itu harus didistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.

Dalam kasus sampel tinja, satu (1) gram tinja ditimbang dan dihomogenisasi dalam 9 mL air peptonated steril 0,1%, sesuai dengan pengenceran 1/10. Kemudian pengenceran serial dilakukan, sampai pengenceran akhir 10 diperoleh-4.

Akhirnya, 100 μl pengenceran 10 diambil-2, 10-3 dan 10-4 dan setiap pengenceran diunggulkan pada agar MRS, didistribusikan secara seragam dengan Drigalski spatula.

Menghitung bakteri asam laktat

Dalam hal ini penyemaian dilakukan secara mendalam.

Untuk sampel ASI, ambil 1 mL dan letakkan dalam tabung plastik kerucut yang steril. Agar MRS ditambahkan pada suhu sekitar 40 ° C hingga volume akhir 25 mL, menghasilkan campuran yang homogen. Selanjutnya, ia dituangkan ke dalam cawan petri steril dengan cara yang seragam dan dibiarkan berdiri sampai terpolimerisasi..

Pengenceran dibuat untuk sampel tinja, seperti dijelaskan di atas. Ambil 1 mL setiap pengenceran dan tempatkan di tabung plastik kerucut steril. Agar MRS cair ditambahkan ke volume 25 mL.

Campuran setiap pengenceran dituang secara seragam ke dalam cawan Petri steril. Akhirnya biarkan sampai polimerisasi.

Di tingkat Penelitian

Setiap hari studi tentang bakteri asam laktat menjadi lebih menarik; terutama para peneliti berusaha untuk mengetahui strain baru dan potensi mereka sebagai pemicu fermentasi untuk standarisasi dalam pembuatan produk susu, di antara kegunaan lain.

Dalam pengertian ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar M.R.S. untuk melakukan penelitian di mana mereka mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi bakteri asam laktat hadir dalam pengrajin keju Venezuela.

Dalam keju mereka menemukan keberadaan bakteri dari genera Lactococcus dan Lactobacillus, dan menyimpulkan bahwa campuran strain yang diisolasi cocok sebagai strain starter dalam pembuatan keju dari susu pasteurisasi..

Di sisi lain, Sánchez et al. (2017) menggunakan agar M.R.S. untuk menyelidiki keberadaan bakteri asam laktat dalam saluran pencernaan anak babi, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktivitas anak babi yang sehat.

Dengan media ini mereka berhasil mengisolasi empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.

Demikian juga, Báez et al. (2019) menggunakan agar M.R.S. untuk mengevaluasi bakteri asam laktat (BAL) dan bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.

Mereka berhasil mengisolasi 11 BAL dan 3 Bifidobacteria sp dalam ASI, dan 8 BAL dan 2 Bifidobacteria sp. di bangku Semua memenuhi parameter tertentu yang mengakreditasi mereka sebagai bakteri dengan aktivitas probiotik.

Para penulis menyimpulkan bahwa ASI dan tinja bayi yang disusui secara eksklusif berfungsi sebagai sumber alami bakteri probiotik.

Kontrol kualitas

Untuk mengevaluasi kualitas M.R.S. strain kontrol dapat digunakan seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cereus.

Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteri pertama, sementara E. coli dan Bacillus cereus harus dihambat secara keseluruhan.

Referensi

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat dari Keju Venezuela yang Merokok Buatan Tangan Andes. Penggunaannya sebagai Budidaya Pemula. Ilmuwan (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tersedia di: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Saluran Pencernaan Anak Babi. Investigasi Rev. dokter hewan Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tersedia di: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluasi bakteri asam laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan feses bayi di kotamadya Acevedo, Miranda 2017. Pekerjaan sarjana untuk kualifikasi gelar sarjana Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.
  4. Laboratorium Inggris Agar M.R.S 2015. Tersedia di: britanialab.com
  5. Kontributor Wikipedia. Agar MRS Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 10 Januari 2018, 19:44 UTC. Tersedia di: wikipedia.org Diakses 17 Februari 2019.
  6. Roy D. Media untuk isolasi dan enumerasi bifidobacteria dalam produk susu. Mikrobiol Makanan Int J, 200128; 69 (3): 167-82.