Agar, persiapan, dan penggunaan Agar LIA (Lysine Iron)



itu LIA agar (Lysine Iron) adalah tes biokimia yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae. Media ini dibuat oleh Edwards dan Fife, berdasarkan formula Falkow.

Awalnya tes ini adalah kaldu yang mengandung pepton, ekstrak ragi, glukosa, L-lisin, bromokresol ungu dan air suling. Edwards and Fife menambahkan agar-agar, ferric ammonium citrate dan sodium thiosulfate.

Tes ini pada dasarnya terdiri dari menunjukkan keberadaan enzim lisin dekarboksilase, yang mampu bereaksi dengan gugus karboksil asam amino L-lisin. Deaminasi asam amino juga dapat terjadi karena adanya enzim lisin deaminase.

Selain itu, komposisi media memungkinkan untuk menunjukkan kapasitas beberapa genera bakteri untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Akhirnya, dimungkinkan juga untuk mengamati pembangkitan gas di tengah.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Peptone dan ekstrak ragi
    • 1.2 Glukosa
    • 1.3 L-lisin
    • 1.4 indikator pH (bromocresol ungu)
    • 1.5 Amonium besi sitrat dan natrium tiosulfat
  • 2 Interpretasi ujian
    • 2.1 Dekarboksilasi lisin
    • 2.2 Deaminasi lisin
    • 2.3 Produksi hidrogen sulfida (H2S)
  • 3 Rekam hasil
  • 4 Persiapan
  • 5 Penggunaan
  • 6 Referensi

Yayasan

Ekstrak pepton dan ragi

Seperti kebanyakan media kultur, agar besi lisin mengandung komponen yang menyediakan sumber nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Komponen-komponen ini diwakili oleh pepton dan ekstrak ragi.

Glukosa

Selain itu, agar ini mengandung glukosa karbohidrat yang dapat difermentasi. Diketahui bahwa semua bakteri dari keluarga Enterobacteriaceae memfermentasi glukosa.

Langkah ini sangat penting, karena akan bertanggung jawab untuk mengasamkan media, suatu kondisi penting untuk enzim lisin dekarboksilase, jika ada, untuk bertindak pada substratnya..

Pada beberapa genera bakteri, produksi gas akibat fermentasi glukosa dapat diamati.

Gas dibuktikan ketika ada perpindahan agar-agar dalam tabung, meninggalkan ruang kosong di bagian bawah tabung, atau dengan memecah media dalam dua atau lebih bagian.

L-lisin

Setelah lisin didekarboksilasi, diamina (kadaverin) dan karbon dioksida terbentuk.

Dekarboksilasi terjadi dengan adanya koenzim piridoksal fosfat. Reaksi ini tidak dapat diubah.

Indikator PH (bromocresol ungu)

Semua perubahan pH terjadi dalam medium oleh reaksi yang berbeda, dideteksi oleh indikator pH ungu bromokresol.

Dalam pengertian ini, ketika ada pengasaman media berubah menjadi kuning, dan ketika ada alkalisasi media kembali ke warna ungu atau ungu asli.

Ketika deaminasi lisin terjadi dengan adanya enzim lisin deaminase, warna kemerahan terbentuk di permukaan, khas pada genus Proteus, Providencia dan beberapa spesies Morganella..

Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa selama proses deaminasi asam alfa-keto-karbonat terbentuk, yang bereaksi dengan amonium sitrat dengan adanya oksigen, yang menyebabkan warna yang disebutkan di atas..

Amonium ferric sitrat dan natrium tiosulfat

Di sisi lain, bakteri yang menghasilkan hidrogen sulfida akan dibuktikan dengan adanya natrium tiosulfat (sumber sulfur) dan ferric ammonium citrate, yang merupakan pengembang H2S.

Bakteri yang memiliki enzim tiosulfat reduktase memiliki kemampuan untuk bertindak dengan mengurangi natrium tiosulfat yang ada, membentuk sulfit dan hidrogen sulfida (H2S).

Yang terakhir adalah gas tidak berwarna, tetapi ketika bereaksi dengan garam besi membentuk logam besi sulfida, yang merupakan senyawa tidak larut (endapan hitam terlihat).

Namun, kapasitas formasi H2S dengan media ini sangat tidak dapat diandalkan, karena beberapa bakteri negatif dekarboksilase lisin mampu menghasilkan H2S tidak akan membentuk endapan hitam, karena keasaman medium mengganggu. Karena itu disarankan untuk memeriksa dengan cara lain yang mengandung zat besi.

Interpretasi ujian

Dekarboksilasi lisin

Tabung harus dibaca setelah akhir 24 jam inkubasi, jika tidak ada risiko salah menafsirkan reaksi, melaporkan negatif palsu.

Harus diingat bahwa reaksi pertama yang akan terjadi adalah fermentasi glukosa, oleh karena itu semua tabung setelah 10 hingga 12 jam akan menguning.

Jika pada akhir periode inkubasi (24 jam) diamati latar belakang berwarna kuning dengan permukaan ungu atau ungu, reaksinya negatif. Warna ungu permukaan sesuai dengan alkalinisasi medium dengan menggunakan pepton.

Reaksi positif adalah reaksi di mana bagian bawah dan permukaan tabung benar-benar ungu, yaitu, kembali ke warna aslinya.

Karena itu, yang menentukan kepositifan tes adalah pangkalan atau dasar media. Jika Anda ragu dengan warnanya, Anda dapat membandingkannya dengan tabung LIA yang tidak diinokulasi.

Deaminasi lisin

Sebuah tabung yang membuktikan deaminasi lisin akan memiliki permukaan coklat kemerahan dan latar belakang kuning (asam), atau seluruh tabung coklat kemerahan..

Reaksi ini ditafsirkan sebagai negatif untuk dekarboksilasi lisin, tetapi positif untuk deaminasi lisin.

Reaksi ini didefinisikan dan ditafsirkan dalam bevel.

Produksi hidrogen sulfida (H2S)

Reaksi positif diamati dengan munculnya endapan hitam di seluruh atau sebagian medium. Umumnya antara batas bevel dan alas.

Jika endapan terjadi di seluruh tabung, itu tidak akan menunjukkan reaksi lain yang terjadi pada medium.

Catat hasilnya

Saat menginterpretasikan tes, hasilnya dicatat sebagai berikut:

Pertama baca bevel, lalu bagian bawah atau taco, kemudian produksi H2S, dan akhirnya produksi gas.

Contoh: K / A + (-). Ini berarti:

  • K: Bezel alkali (ungu)
  • A: Latar belakang asam (kuning), yaitu, reaksi dekarboksilasi negatif dan deaminasi negatif.
  • +: Produksi hidrogen sulfida
  • (-): Tanpa gas.

Persiapan

Timbang 35 gr lisin agar dehidrasi besi dan larut dalam satu liter air suling.

Panaskan sampai agar benar-benar larut, jadi rebus sebentar agar sering diaduk. Distribusikan 4 ml media dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan biarkan beristirahat dengan cara miring, sedemikian rupa sehingga ada dasar yang dalam dan bevel pendek.

Simpan dalam lemari es 2-8 ° C. Biarkan meredamnya sebelum menanam strain bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​dan media disiapkan warna ungu kemerahan.

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,7 ± 0,2.

Media berubah menjadi kuning dengan pH sama dengan atau kurang dari 5,2, dan ungu pada pH 6,5 ke atas.

Penggunaan

Tes ini, bersama dengan tes biokimia lainnya, digunakan untuk mengidentifikasi basil dari famili Enterobacteriaceae..

Media ditaburkan dengan loop lurus atau jarum, satu atau dua pukulan dibuat ke bagian bawah tabung, dan kemudian permukaan media tersebut zig-zag..

Diinkubasi selama 24 jam pada 35-37 ° C dalam aerobiosis. Jika perlu dibiarkan inkubasi selama 24 jam lebih.

Ini terutama berguna untuk membedakan dari spesies Citrobacter lactose Negatif Salmonellas sp.

Referensi

  1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorium Britania. Agar besi lisin. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  5. Laboratorium BD BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tersedia di: bd.com
  6. Laboratorium Valtek Medium L.I.A. 2009. Tersedia di: andinamedica.com