Yayasan Agar Hektoen, persiapan dan penggunaan



itu Hektoen agar atau agar Hektoen enterik adalah media kultur padat, selektif dan diferensial. Itu dibuat di Institut Hektoen oleh King dan Metzger untuk isolasi bakteri enteropatogenik dari genera Shigella dan Salmonella..

Media ini terdiri dari proteose pepton, ekstrak ragi, garam empedu, laktosa, sukrosa, salisin, natrium tiosulfat, natrium klorida, sitrat besi, amonium sitrat, biru bromotimol, asam fuchsin dan agar. Formulasi ini memungkinkan untuk membedakan genera Shigella dan Salmonella dari sisa bakteri yang mampu tumbuh di media ini.

Meskipun ada cara lain dengan fungsi yang sama dengan agar Hektoen, ini memberikan keuntungan lebih besar dibandingkan dengan cara lain, terutama ketika Anda ingin memulihkan spesies Shigella.

Spesies dari kedua genus menghasilkan masalah pencernaan yang parah pada manusia karena konsumsi makanan yang terkontaminasi; oleh karena itu penularannya adalah fecal - oral. Itulah sebabnya penggunaan agar Hektoen terutama ditunjukkan dalam analisis mikrobiologis sampel tinja dan makanan..

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
  • 3 Gunakan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Hektoen agar mengandung pepton dan ekstrak ragi sebagai sumber nutrisi, menyediakan unsur-unsur penting untuk pengembangan mikroba.

Namun, ia juga memiliki garam empedu yang bertindak dengan menghambat pertumbuhan beberapa bakteri, terutama Gram positif dan beberapa Gram negatif. Karena alasan inilah media dianggap selektif.

Di sisi lain, agar Hektoen adalah media diferensial. Sifat ini dianugerahkan oleh adanya karbohidrat yang dapat difermentasi seperti laktosa, sakarora dan salisin, bersama dengan sistem indikator pH, yang diwakili oleh bromotimol biru dan asam fuchsin..

Semua bakteri yang mampu tumbuh di media ini yang tidak termasuk dalam genus Salmonella dan Shigella akan mengembangkan koloni salmon atau oranye dengan pengecualian genus Proteus. Hal ini disebabkan oleh fermentasi dari satu atau beberapa karbohidrat yang hadir, yang mengasamkan media, yang menyebabkan indikator pH berubah..

Untuk bagiannya, genus Shigella dan Salmonella tidak dapat memfermentasi ke karbohidrat yang ada, hanya menggunakan peptonas sebagai sumber energi, yang menjadikan alkali lingkungan dan oleh karena itu koloninya berwarna biru-hijau.

Juga dalam media ini dapat dibedakan bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida (gas tidak berwarna). Sodium tiosulfat bertindak sebagai sumber sulfur sementara zat besi sitrat adalah agen pengungkap. Kedua senyawa memungkinkan pembentukan endapan hitam dari besi sulfida yang membuktikan reaksi.

Endapan hitam di tengah-tengah koloni dengan lingkaran transparan di sekitar memberi tampilan mata ikan. Karakteristik ini menunjukkan adanya genus Salmonella.

Akhirnya, natrium klorida mempertahankan keseimbangan osmotik dan agar-agar memberikan konsistensi padat pada medium.

Persiapan

Timbang 76 g media dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Kocok campuran dengan kuat dan biarkan selama 10 hingga 15 menit. Dapat dipanaskan dan direbus, memberikan gerakan berputar sampai benar-benar larut. Media ini tidak diautoklaf.

Ketika media mencapai suhu sekitar 45 ° C, volume 20 ml langsung dituangkan ke dalam cawan Petri steril..

Agar-agar dibiarkan membeku. Saat itu mereka siap digunakan. Dianjurkan untuk menggunakannya segera. Jika tidak memungkinkan, mereka harus disimpan dalam lemari es sampai digunakan.

Piring harus dikeluarkan lebih awal dari lemari es sebelum menanamnya untuk suhu ruangan.

PH medium harus 7,5 ± 0,2. Warna media dehidrasi adalah ungu dan disiapkan berwarna hijau kecoklatan.

Gunakan

Penggunaan agar Hektoen direkomendasikan untuk mencari bakteri dari genus Shigella dan Salmonella dalam sampel tinja dan makanan..

Kemungkinan mengisolasi bakteri ini sangat meningkat jika sampel sebelumnya diperkaya dalam kaldu khusus, seperti kaldu selenite, kalen selenite sistin, kaldu tetrationat, dll..

Inokulum harus kuat dan penyemaian dilakukan dengan pergoresan. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.

Inkubasi direkomendasikan selama 48 jam karena karakteristik koloni lebih jelas untuk interpretasi dan diferensiasi mereka saat ini.

Kontrol kualitas

Untuk melakukan kontrol kualitas pada media ini, strain bakteri bersertifikat digunakan, seperti: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 dan Shigella sonnei ATCC 25931.

Hasil yang diharapkan adalah sebagai berikut: Salmonella typhimurium dan  Salmonella enteritidis mereka harus mengembangkan koloni hijau-biru dengan atau tanpa pusat hitam. Sedangkan spesies Shigella akan tumbuh sebagai koloni biru-hijau.

Anda juga dapat memasukkan strain Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Dalam kasus ini karakteristik yang diamati adalah sebagai berikut: E. coli dan K. pneumoniae Dalam medium ini mereka akan mengembangkan koloni salmon-ke-oranye, dengan endapan dengan warna yang sama di sekitarnya. Sementara itu, Proteus akan mengembangkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam.

Sementara S. aureus dan  E. faecalis harus dihambat, kadang-kadang E. faecalis berhasil tumbuh sebagai koloni kuning, sangat kecil.

Di sisi lain, karena media ini tidak disterilkan dalam autoklaf, penting untuk mengevaluasi sterilitas media. Oleh karena itu, setiap batch yang disiapkan harus diinkubasi satu atau dua piring tanpa diinokulasi pada 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Jelas diharapkan bahwa tidak ada pertumbuhan dalam bentuk apa pun.

Keterbatasan

-Spesies protein dapat berkembang di lingkungan ini dan karakteristik koloninya dapat dikacaukan dengan spesies Salmonella atau Shigella. Untuk alasan ini setiap koloni yang mencurigakan harus dikonfirmasi dengan tes biokimia.

-Hal ini diperlukan untuk menemani penggunaan media ini dengan agars kurang selektif lainnya, karena jika mikroorganisme yang dicari ditemukan dalam konsentrasi rendah, itu mungkin tidak berkembang dalam media ini..

-Jangan terlalu panas selama persiapan, karena panas yang berlebihan mengubah komposisi medium.

-Koloni Salmonella yang memfermentasi laktosa yang tidak biasa mungkin tampak tanpa disadari.

Referensi

  1. Kontributor Wikipedia. Agar enterik Hektoen. Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 13 Maret 2019, 23:38 UTC. Tersedia di: .wikipedia.org / Diakses 16 Maret 2019.
  2. Laboratorium BD BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tersedia di: bd.com
  3. Laboratorium Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  4. Laboratorium Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Hektoen agar. Tersedia di: f-soria.es
  5. Manual Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. Edisi ke-2. Tersedia di: bd.com/europe