Yayasan Agar Endo, persiapan dan penggunaan



itu Endo agar atau medium Endo adalah media kultur diferensial yang solid dengan tingkat selektivitas tertentu. Formula asli dibuat oleh Endo pada tahun 1904 untuk membedakan bakteri fermentasi laktosa dari bakteri non-fermentasi. Pada awalnya dirancang untuk isolasi Salmonella typhi, tetapi kemudian tujuan media beralih ke mencari coliform.

Prinsip agar Endo tetap dipertahankan, tetapi formulasinya telah mengalami banyak perubahan selama bertahun-tahun. Saat ini, medianya terdiri dari jaringan hewan yang dicerna peptida, laktosa, dipotassium hidrogen fosfat, natrium sulfit, fuchsin dasar dan agar.

Penggunaan utama media telah dikaitkan dengan isolasi dan diferensiasi basil Gram negatif milik keluarga Enterobacteriaceae dan keluarga lain di sekitarnya..

Untuk waktu yang lama digunakan dalam mendeteksi coliform dalam sampel air, susu dan makanan, tetapi saat ini penggunaan media ini telah digantikan oleh orang lain dari fungsi yang sama. Namun, beberapa laboratorium mikrobiologi menggunakan agar ini untuk isolasi Enterobacteriaceae dari sampel asal klinis.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Endo agar
    • 2.2 Varian agar-m-Endo
  • 3 Gunakan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Endo agar mengandung pepton yang berfungsi sebagai sumber asam amino, nitrogen, karbon, dan energi, yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme ringan..

Di sisi lain, karakter agar-agar yang sedikit selektif disediakan dengan penambahan natrium sulfit dan fuchsin dasar; kedua komponen tersebut menghambat sebagian atau total perkembangan sebagian besar bakteri Gram-positif.

Karakter diferensial diberikan oleh adanya karbohidrat yang dapat difermentasi, yang dalam hal ini adalah laktosa dan fuchsin dasar, yang juga berfungsi sebagai indikator pH..

Bakteri gram negatif yang tumbuh pada agar ini dan mampu memfermentasi laktosa akan membentuk koloni merah muda yang kuat; menjadi patognomonik dari Escherichia coli pembentukan koloni merah gelap dengan warna hijau metalik bersinar. Hal ini disebabkan tingginya produksi asam dari fermentasi karbohidrat.

Perlu dicatat bahwa media yang ada di sekitar koloni juga berubah menjadi warna merah muda yang kuat. Sementara basil gram negatif non-fermentasi laktosa membentuk koloni merah muda pucat mirip dengan sedang atau tidak berwarna.

Dipotassium hidrogen fosfat menyeimbangkan pH medium dan agar-agar adalah komponen yang memberikan konsistensi padat.

Persiapan

Endo Agar

Timbang 41,5 gr medium kering dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan campuran dengan sering diaduk sampai ada total pembubaran media. Sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C, pada tekanan 15 lb, selama 15 menit.

Saat melepas dari autoklaf, biarkan dingin hingga suhu sekitar 45-50 ° C, kocok campurannya untuk dihomogenisasi sebelum disajikan. Tuang 20 ml ke dalam cawan Petri steril.

Biarkan piring mengeras, membalikkan dan menyimpan dalam kotak atau bungkus dengan kertas gelap sebelum disimpan di lemari es. Sangat penting untuk melindungi media yang disiapkan dari cahaya langsung. Praktik yang disarankan adalah menyiapkan jumlah persis yang akan dibutuhkan.

Jika disimpan dalam lemari es, piring-piring tersebut harus ditempa sebelum digunakan.

PH media harus antara 7,2 hingga 7,6 dan warna media yang disiapkan berwarna merah muda pucat..

Varian agar m-Endo

Ada versi lain dari agar Endo (m-Endo) yang mengikuti formula McCarthy, Delaney dan Grasso, yang mengandung lebih banyak senyawa dan bervariasi dalam cara persiapan..

Varian ini mengandung: laktosa, triptosa, pencernaan enzimatik kasein, pencernaan enzimatik jaringan hewan, natrium klorida, kalium fosfat dibasat, natrium sulfit, ekstrak ragi, kalium fosfat monobasa, fuchsin dasar, natrium deoksikolat, lauril sulfat natrium dan agar.

Dalam hal ini, kami menimbang 51 g media dehidrasi dan menangguhkannya dalam 1 liter air suling yang mengandung 20 ml etanol.

Panaskan sedikit sambil diaduk sampai media benar-benar larut. Jangan terlalu panas dan jangan mensterilkan dalam autoklaf. Setelah campuran homogen, sajikan dalam cawan petri steril dan biarkan menjadi padat.

Gunakan

Di beberapa negara masih digunakan untuk penghitungan total dan tinja dalam sampel air dan makanan, terutama keberadaan Escherichia coli sebagai indikator utama kontaminasi tinja.

Agar M-Endo direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk pemantauan dan pengendalian program disinfeksi dan pengolahan air limbah, serta dalam evaluasi kualitas air minum.

Metode yang paling banyak digunakan adalah filtrasi membran, setelah pengayaan sampel dengan kaldu Lauryl sulfat selama 2 hingga 4 jam.

Ini juga dapat digunakan sebagai pengganti agar EMB dalam analisis mikrobiologis makanan dan air dengan teknik angka yang paling memungkinkan (NMP), khususnya dalam fase konfirmasi lengkap untuk menguatkan keberadaan E. coli dari kaldu EC keruh.

Kontrol kualitas

Untuk mengevaluasi kualitas batch agar Endo yang disiapkan, galur kontrol yang dikenal atau disertifikasi ditaburkan.

Di antara strain yang dapat digunakan untuk tujuan ini adalah: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 dan Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Strain ditaburkan oleh kelelahan dan diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Hasil yang diharapkan adalah:

  • Untuk Escherichia coli: koloni merah kuat, dengan kilau logam.
  • Untuk E. cloacae dan K. pneumoniae koloni harus berwarna merah muda mukoid.
  • Dalam kasus S. typhimurium, S. flexneri dan P. mirabilis koloni biasanya berwarna merah muda pucat atau tidak berwarna.
  • Akhirnya, E. faecalis diharapkan sebagian terhambat, oleh karena itu pertumbuhannya harus buruk dengan koloni merah muda yang sangat kecil.

Keterbatasan

-Media Endo memiliki daya selektif yang rendah, oleh karena itu, ada kemungkinan bahwa beberapa mikroorganisme Gram positif seperti Staphylococcus, Enterococcus dan bahkan ragi dapat tumbuh..

-Basil lain yang tidak termasuk dalam Keluarga Enterobacteriaceae dapat berkembang dalam media ini, seperti misalnya Pseudomonas sp dan Aeromonas sp. Karakteristik dari strain ini adalah koloni tidak beraturan yang tidak berwarna.

-Media yang disiapkan ini sangat sensitif terhadap cahaya, oleh karena itu, paparan yang terlalu lama terhadap ini akan merusak sistem indikator, merusak media secara permanen..

-Komponen media dianggap karsinogenik, oleh karena itu kontak langsung harus dihindari.

-Media dehidrasi sangat higroskopis dan harus disimpan dalam wadah aslinya pada suhu kamar, tertutup rapat dan di lingkungan yang kering.

Referensi

  1. Laboratorium BD Endo Agar. 2013. Tersedia di: bd.com
  2. Laboratorium Neogen M Endo Agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, Ensiklopedia gratis. 7 Sep 2017, 08:27 UTC. 28 Feb 2019, 22:55. Tersedia dalam: en.wikipedia.
  4. Laboratorium MercK. Endo agar 2019. Tersedia di: merckmillipore.com
  5. Lembar Teknis Laboratorium. M -Endo Agar LES. 2015. Tersedia di: liofilchem.net