Agar, persiapan, dan penggunaan Agar EMB



itu Agar EMB adalah media kultur padat selektif dan diferensial yang digunakan untuk isolasi basil Gram negatif, terutama dari keluarga Enterobacteriaceae, dan basil negatif Gram lain yang tidak banyak menuntut. Hal ini juga dikenal dengan EAM akronim, yang berarti biru eosin-metilen.

Media ini dibuat oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Media ini mengandung pepton, laktosa, sukrosa, dipotassium fosfat, agar, eosin, metilen biru dan air. Ini sangat mirip dengan agar MacConkey, terutama jika menggunakan agar EMB dimodifikasi oleh Levine, yang tidak mengandung sukrosa.

Faktanya, masing-masing laboratorium memutuskan apakah itu bekerja dengan satu atau yang lain, karena mereka memenuhi fungsi yang sama, meskipun secara biokimia mereka berbeda.

Itu bahkan menyajikan kelemahan yang sama dengan agar MacConkey klasik dalam hal produksi yang berkerumun oleh genus Proteus. Oleh karena itu, untuk menghindari fenomena ini Anda dapat meningkatkan konsentrasi agar hingga 5%.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Selektif
    • 1.2 Diferensial
  • 2 Persiapan
  • 3 Penggunaan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Pertimbangan akhir
  • 6 Referensi

Yayasan

Selektif

Agar-agar EMB secara halus selektif karena mengandung pewarna anilinik (eosin dan metilen biru), yang bertindak sebagai penghambat, mencegah pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram-positif dan beberapa basil Gram-negatif yang banyak diminati..

Namun, agar ini memiliki kelemahan bahwa beberapa bakteri Gram-positif dapat menahan kehadiran zat penghambat dan tumbuh sebagai koloni punctiform kecil yang tidak berwarna, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus.

Anda juga bisa menanam ragi tertentu, seperti Kompleks Candida albicans, Ini akan memberikan koloni merah muda yang sangat kecil. Bahkan klamidospora dapat dikembangkan dari ragi ini jika sampel ditaburkan pada kedalaman.

Diferensial

Di sisi lain, agar EMB juga merupakan media diferensial, karena pewarna ini bersama-sama (eosin dan metilen biru) memiliki sifat membentuk endapan pada pH asam, oleh karena itu mereka berfungsi sebagai indikator produksi padanya..

Karena itu, bakteri laktosa atau sukrosa yang terfermentasi dengan buruk menghasilkan koloni ungu dalam 24 hingga 48 jam. Misalnya genera Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.

Bakteri yang sangat memfermentasi laktosa, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, sebagai Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, membentuk endapan hitam kehijauan, memberikan karakteristik kilau logam pada spesies ini.

Perlu dicatat bahwa jika media levine EMB digunakan (tanpa sukrosa), Yersinia enterocolitica dan Proteus penneri mereka akan menghasilkan koloni transparan.

Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa atau sukrosa dipelihara oleh keberadaan pepton, yang menyediakan asam amino dan nitrogen yang diperlukan untuk perkembangan bakteri, dan menghasilkan koloni transparan. Misalnya, genera Salmonella dan Shigella, antara lain.

Demikian juga, penting untuk dicatat bahwa genus Acinetobacter dapat menyajikan koloni lavender biru, meskipun itu bukan fermentor laktosa, atau sukrosa, tetapi mereka memiliki sifat memperbaiki metilen biru di dinding selnya. Ini juga dapat terjadi dengan bakteri oksidatif lainnya.

Persiapan

Media dehidrasi asli adalah krem ​​ringan.

Untuk menyiapkan media kultur ini, 36 gram media kering harus ditimbang dan ditangguhkan dalam botol yang berisi satu liter air suling..

Setelah meninggalkan campuran selama 5 menit saat istirahat, bawa fiola ke sumber panas, campur dengan kuat dan terus-menerus sampai mendidih dan benar-benar larut..

Selanjutnya, media kultur terlarut harus disterilkan menggunakan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Pada akhir waktu, itu dihapus dari autoclave dan dibiarkan beristirahat sebentar. Kemudian disajikan bahkan panas (45 - 50 ° C) antara 15 hingga 20 ml agar di setiap cawan petri steril. Mediumnya harus lakmus biru.

Setelah disajikan, piring dibiarkan sedikit terbuka sampai agar-agar menjadi sedikit dingin. Kemudian mereka tertutup dan dibiarkan mengeras sepenuhnya. Kemudian, mereka dipesan dalam wadah plak terbalik dan disimpan dalam lemari es (8 ° C) sampai digunakan.

Prosedur ini lebih disukai dilakukan dalam tudung aliran laminar atau di depan pembakar Bunsen untuk menghindari kontaminasi.

Penting untuk diingat bahwa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang harus ditimbang untuk menyiapkan media kultur.

PH akhir medium harus 7,2 ± 0,2

Penggunaan

Media ini digunakan untuk menabur urin dan feses atau semua jenis sampel klinis, terutama jika dicurigai adanya basil Gram-negatif yang tidak banyak menuntut, seperti basil milik keluarga Enterobacteriaceae, yang tumbuh sangat baik di media ini.

Bakteri enteropatogenik dari genera Shigella dan Salmonella dibedakan oleh koloni yang tidak berwarna atau sedikit kuning.

Basil laktosa non-fermentasi lainnya juga tumbuh, seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Demikian juga, media ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologis makanan dan air, karena sangat ideal untuk fase konfirmasi lengkap dari penentuan coliforms, yaitu, untuk memperkuat keberadaan E. coli dari kaldu EC keruh, dari teknik angka yang paling memungkinkan (NMP).

Kontrol kualitas

Untuk memverifikasi bahwa media kultur yang baru dibudidayakan bekerja dengan baik, galur kontrol dapat ditanam untuk mengamati karakteristik koloni dan memverifikasi bahwa mereka memberi seperti yang diharapkan..

Untuk ini, galur ATCC atau galur yang diidentifikasi dengan baik E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteri Gram-positif, seperti S. aureus.

Diharapkan begitu E. coli Hasilkan koloni hitam kebiruan yang berkembang dengan baik dengan kilau logam hijau. Selama, Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp mereka harus memberikan koloni lendir yang berkembang baik berwarna kebiru-biruan.

Untuk bagiannya, Salmonella typhimurium dan Shigella flexneri, mereka harus mengembangkan koloni besar, tidak berwarna atau dengan sedikit warna kuning.

Akhirnya genre Pseudomonas aeruginosa itu tumbuh sebagai koloni tidak berwarna dengan ukuran tidak teratur, sedangkan bakteri Gram-positif harus benar-benar dihambat atau tumbuh hemat dengan koloni yang sangat kecil.

Pertimbangan terakhir

Kadang-kadang sterilisasi menyebabkan biru metilen berkurang, mengamati media oranye. Agar biru metilen teroksidasi dan warna ungu pulih, ia harus dicampur dengan lembut sampai warnanya pulih.

Juga, setelah sterilisasi dapat mengendapkan pewarna, sehingga harus dicampur dengan baik sebelum menyajikan cawan Petri.

Referensi

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik untuk Analisis Mikrobiologis Makanan. 2nd ed. Fakultas Kimia, UNAM. Meksiko.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisasi dan Distribusi Strain dari Escherichia coli Isolat Berpotensi Patogen dari Ayam Pedaging dari Peternakan Unggas di Peru. Investigasi Rev. dokter hewan Peru 2012 23 (2): 209-219. Tersedia di: scielo.org.
  3. Laboratorium Conda S.A. Eosin Agar dan Methylene Blue. 2010. Tersedia di: condalab.com
  4. Laboratorium Britania. Levine E.M.B (Dengan Eosin dan Methylene Blue) 2011. Tersedia di: britanialab.com
  5. Laboratorium BD BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Dimodifikasi. 2013. Tersedia di: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis mikrobiologis dari Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A