Agar memiliki fondasi, persiapan, dan penggunaan standar

itu agar akun standar adalah media kultur padat, non-selektif, yang dirancang untuk kuantifikasi beban mikroba aerobik yang ada dalam sampel air minum, air limbah, minuman susu, di antara makanan lainnya. Media ini juga dikenal sebagai agar PCA, karena akronimnya dalam Agar Lempeng Inggris. Itu dibuat pada tahun 1953 oleh Buchbinder, Baris dan Goldstein.

Akun media agar standar terdiri dari ekstrak ragi, triptein, glukosa, agar dan air suling. Formulasi ini mengandung unsur-unsur nutrisi dasar yang memungkinkan pengembangan beban mikroba aerobik saat ini, tidak menuntut.

Karena medianya tidak mengandung inhibitor, bakteri dapat berkembang tanpa batasan, sehingga sangat ideal untuk jumlah koloni umum. Namun, teknik kuantifikasi lempeng tidak akan mendeteksi semua bakteri yang ada, tetapi hanya mereka yang mampu tumbuh di bawah kondisi lingkungan yang menjadi sasaran agar-agar yang ditabur..

Dalam hal ini, teknik kuantifikasi lempeng berupaya menentukan secara umum jumlah bakteri tipe aerofil mesofilik, yaitu bakteri yang berkembang pada suhu antara 25 dan 40 ° C, dengan suhu pertumbuhan optimum pada 37 ° C.

Kelompok bakteri ini sangat penting, karena ada sebagian besar bakteri patogen bagi manusia.

Perlu dicatat bahwa kadang-kadang mungkin menarik untuk mengukur jumlah bakteri psikofilik yang ada dalam makanan. Bakteri ini adalah yang berkembang pada suhu rendah (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Demikian juga, bakteri termofilik, yang berkembang dalam kisaran antara 50 ° C hingga 80 ° C atau lebih, dapat menjadi penting dalam jenis makanan tertentu seperti kalengan..

Kuantifikasi mikroba dinyatakan dalam unit pembentuk koloni (CFU) per gram atau mililiter sampel.

Indeks

• 1 Yayasan
• 2 Persiapan
  • 2.1 Untuk teknik menuang piring
  • 2.2 Untuk penanaman di permukaan
• 3 Gunakan
  • 3.1 Teknik menuangkan piring (diunggulkan dengan kedalaman)
  • 3.2 Teknik ditaburkan di permukaan
• 4 Kontrol kualitas
• 5 Keterbatasan
• 6 Referensi

Yayasan

Media penghitungan standar dirancang untuk memungkinkan pengembangan bakteri aerob yang tidak menuntut dengan memuaskan, karena ekstrak ragi, tripheine, dan glukosa menyediakan nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan mikroba yang baik..

Di sisi lain, media memiliki warna yang jelas dan penampilan yang transparan, oleh karena itu media ini ideal untuk menampilkan koloni yang dikembangkan dengan metode penaburan dalam (menuangkan ke dalam piring).

Dimungkinkan juga untuk menghitung koloni dengan metode menabur di permukaan dengan spatula Drigalski.

Ketika beban mikroba tinggi, pengenceran desimal dari sampel yang diteliti harus dilakukan untuk menghitung CFU.

Perlu dicatat bahwa media ini direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk penghitungan mesofil aerobik.

Persiapan

Timbang 23,5 gr media kering dan larutkan dalam satu liter air suling. Untuk benar-benar larut campuran harus dipanaskan, aduk terus sampai mendidih. Langkah-langkah berikut ini tergantung pada teknik penyemaian yang akan digunakan.

Untuk teknik menuang piring

Distribusikan dengan mengeluarkan 12 hingga 15 ml ke dalam tabung reaksi. Selanjutnya, sterilkan dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit. Izinkan untuk memadat secara vertikal dalam bentuk blok. Simpan di lemari es sampai digunakan.

Lelehkan isyarat saat akan digunakan. Setelah meleleh, simpan di bak air pada suhu 44-47 ° C saat sampel sedang disiapkan.

Untuk penanaman di permukaan

Sterilkan media dalam autoklaf pada 121 ° C dan kemudian distribusikan 20 ml dalam cawan petri steril. Biarkan mengeras, balikkan dan simpan di lemari es sampai digunakan.

Marah piring sebelum digunakan. PH medium harus 7,0 ± 0,2.

Gunakan

Penghitungan standar agar digunakan dalam teknik penghitungan mesofil aerobik selama analisis mikrobiologis air dan makanan. Penghitungan mesofil aerobik diperlukan, karena menentukan kualitas sanitasi sampel yang diteliti.

Penerapan teknik ini (menggunakan media ini) memungkinkan visualisasi makroskopis koloni terisolasi untuk kuantifikasi mereka.

Teknik penuangan plak (diunggulkan dengan kedalaman)

-Prosedur

Teknik ini terdiri dari:

1) Menghomogenisasi sampel untuk mendistribusikan kembali bakteri yang ada.

2) Suatu suspensi awal dilakukan dalam botol atau kantung steril, dengan menghormati perbandingan 10 g atau 10 ml sampel dalam 90 ml pengencer (10^-1).

3) Dari suspensi awal pengenceran desimal yang relevan dibuat tergantung pada jenis sampel. Contoh: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Pengenceran dibuat dengan air pepton atau buffer fosfat.

Untuk melakukan ini, ambil 1 ml suspensi awal dan tempatkan dalam 9 ml pengencer, lanjutkan pengenceran jika perlu, ambil sekarang 1 ml pengenceran.^-2 dan seterusnya.

4) Ambil 1 ml setiap pengenceran dan masukkan ke dalam cawan Petri steril yang kosong.

5) Tambahkan ke setiap pelat 12 hingga 15 ml agar count standar yang sebelumnya dilelehkan dan atur pada 44 - 47 ° C.

6) Berikan gerakan memutar yang halus ke pelat untuk mendistribusikan sampel ke agar secara seragam dan biarkan mengeras.

7) Membalikkan pelat dan menginkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam.

8) Setelah waktu selesai, lanjutkan untuk memeriksa piring dan menghitung koloni dalam pengenceran yang memungkinkannya. Dipilih untuk menghitung pelat yang memiliki antara 30 hingga 300 CFU.

Penghitungan dapat dilakukan secara manual atau peralatan penghitung koloni dapat digunakan.

Nilai yang diizinkan per ml sampel dapat bervariasi dari satu negara ke negara lain sesuai dengan standar yang mengaturnya.

-Perhitungan UFC

Perhitungan umum dibuat menggunakan rumus berikut:

Ekspresikan hasilnya dalam 1 atau 2 digit, dikalikan dengan basis yang sesuai 10. Contoh: jika hasilnya 16.545, dibulatkan berdasarkan angka ketiga menjadi 17.000 dan akan dinyatakan sebagai berikut: 1,7 x 10⁴. Sekarang, jika hasilnya 16.436 dibulatkan menjadi 16.000 dan dinyatakan 1,6 x 10⁴.

Teknik ditanam di permukaan

-Prosedur

-Menyuntik dengan 0,1 ml sampel langsung jika cairan, suspensi awal 10^-1 atau pengenceran berurutan 10^-2, 10^-3 dll, di tengah piring agar akun standar.

-Bagikan sampel secara merata dengan Drigalski spatula atau batang kaca berbentuk L. Diamkan selama 10 menit.

-Membalikkan pelat dan menginkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam.

-Lanjutkan untuk menghitung koloni, pilih piring yang berada dalam kisaran antara 20 - 250 CFU.

-Perhitungan UFC

Untuk perhitungan, faktor pengenceran diterapkan, yang merupakan kebalikannya. Angka dibulatkan menjadi 2 digit signifikan (pembulatan menurut digit ketiga) dan dinyatakan dalam kekuatan basis 10. Sebagai contoh, jika 224 CFU dihitung dalam sampel tanpa pengenceran (10^-1), 22 x 10 dilaporkan¹  UFC, tetapi jika jumlahnya 225 maka dilaporkan 23 x 10¹ UFC.

Sekarang, jika Anda menghitung 199 CFU dalam pengenceran 10^-3, 20 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC, tetapi jika 153 CFU dihitung dalam pengenceran yang sama, 15 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC.

Kontrol kualitas

Media kultur hitung standar dapat dievaluasi menggunakan galur bersertifikasi yang diketahui, seperti: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Jika media kultur dalam kondisi optimal, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan dalam semua kasus, kecuali untuk L. fermentum yang dapat memiliki kinerja reguler.

Untuk menilai sterilitas media kultur, satu atau dua lempeng dari masing-masing bets yang disiapkan (tidak diinokulasi) harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam. Pada akhir waktu ini, tidak ada pertumbuhan atau perubahan warna media yang harus diamati..

Keterbatasan

-Jangan melelehkan agar lebih dari sekali.

-Media yang disiapkan dapat bertahan hingga 3 bulan asalkan disimpan di lemari es dan terlindung dari cahaya.

-Media ini tidak cocok untuk mikroorganisme, maupun anaerob.

Referensi

1. Administrasi Nasional Obat Makanan dan Teknologi Medis (ANMAT). Analisis mikrobiologis makanan, metodologi analisis resmi, indikator mikroorganisme. 2014 Volume 3. Tersedia di: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Plate Count Agar. 2009. Tersedia di: http://f-soria.es
3. Laboratorium Conda Pronadisa. Agar untuk metode standar (PCA) sesuai dengan APHA dan ISO 4833. Tersedia di: condalab.com
4. Laboratorium Britania. Mengandalkan piring agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik untuk Analisis Mikrobiologis Makanan. 2nd ed. Fakultas Kimia, UNAM. Meksiko Tersedia di: depa.fquim.unam