Agar, penggunaan dan persiapan CLED agar



itu Agar CLED (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) adalah media kultur padat diferensial, yang digunakan untuk diagnosis infeksi saluran kemih. Komposisi media kultur dirancang untuk pertumbuhan patogen kemih yang baik dan ideal untuk kuantifikasi unit pembentuk koloni (CFU).

Media kultur CLED bersifat non-selektif, karena mikroorganisme Gram-negatif dan juga Gram-positif dapat tumbuh di dalamnya. Tetapi ini bukan masalah, karena sebagian besar infeksi saluran kemih disebabkan oleh satu jenis mikroorganisme.

Dalam kasus infeksi polimikroba 2 atau 3 bakteri yang berbeda dapat diperoleh, tetapi sangat jarang dan sebagian besar waktu sampel terkontaminasi.

Di antara bakteri Gram-negatif yang dapat tumbuh di media ini adalah basil milik keluarga Enterobacteriaceae dan basil enterik lainnya, uropatogen yang paling sering diisolasi dalam sampel urin, berikut ini: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, antara lain.

Demikian juga, di antara bakteri Gram-positif yang dapat tumbuh di media ini adalah Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp dan mereka bahkan dapat menumbuhkan ragi, seperti kompleks Candida albicans.

Namun, karena komposisi kimia medium itu tidak memungkinkan pertumbuhan beberapa patogen genitourinari yang menuntut, seperti Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, antara lain.

Indeks

  • 1 dasar agar-agar CLED
  • 2 Foundation agar CLED (Bevis)
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Menabur sampel urin
    • 3.2 Interpretasi
    • 3.3 Identifikasi
  • 4 Persiapan
  • 5 Referensi

Fondasi agar-agar CLED

Media kultur CLED memiliki ekstrak daging sumber energi, hidrolisat kasein pankreas dan hidrolisat gelatin. Mereka menyediakan nutrisi untuk pengembangan bakteri ringan.

Ini juga mengandung sistin, asam amino yang memungkinkan pertumbuhan coliform, dibedakan oleh ukurannya yang kecil.

Demikian juga, laktosa mengandung karbohidrat yang dapat difermentasi, karena alasan ini medium ini berbeda; mampu membedakan bakteri yang berfermentasi dari laktosa yang tidak berfermentasi.

Bakteri fermentasi mengubah pH medium dengan memproduksi asam, membentuk koloni kuning, sedangkan bakteri non-fermentasi tidak menghasilkan perubahan dalam medium, oleh karena itu mereka mengambil warna agar asli, warna hijau..

Reaksi fermentasi terungkap berkat adanya indikator pH, yang dalam medium ini berwarna biru bromotimol.

Di sisi lain, konsentrasi medium elektrolit yang rendah menghambat pertumbuhan genus yang khas Proteus, disebut efek berkerumun. Ini menghasilkan keuntungan sehubungan dengan cara lain, karena memungkinkan penghitungan UFC, termasuk jika ada genus Proteus.

Namun, konsentrasi elektrolit yang rendah menghambat pertumbuhan beberapa spesies genus Shigella, menjadi ini kerugian sehubungan dengan cara lain.

Dasar CLED agar (Bevis)

Ada varian atau modifikasi media ini yang dibuat oleh Bevis, yang memasukkan komposisi asam fuchsin asli (indikator Andrade) ke dalam komposisi asli. Kerjanya bersama-sama dengan bromothymol blue untuk membedakan fermentasi dari bakteri non-fermentasi.

Perbedaan antara media konvensional dan modifikasi adalah warna yang diadopsi oleh koloni. Dalam kasus bakteri fermentasi laktosa, koloni memperoleh warna oranye kemerahan dengan warna merah muda atau merah, sedangkan yang non-fermentasi berwarna abu-abu kebiruan..

Penggunaan

CLED agar digunakan khusus untuk menabur sampel urin. Penggunaan media ini sangat sering di laboratorium Eropa, sedangkan di Amerika kurang digunakan.

Pengumpulan sampel harus memenuhi parameter tertentu untuk mendapatkan hasil yang andal, termasuk:

  • Tidak minum antibiotik sebelum mengambil sampel.
  • Lebih disukai mengambil urin dari jam pertama pagi hari, karena lebih terkonsentrasi, ketika tidak mungkin untuk mengambil sampel dengan metode invasif.
  • Cuci alat kelamin dengan seksama sebelum mengambil sampel.
  • Buang aliran buang air kecil pertama dan kemudian tempatkan wadah.
  • Kumpulkan antara 25 hingga 30 ml urin dalam wadah berlabel steril.
  • Segera bawa ke laboratorium yang dikelilingi es.
  • Ini harus diproses sebelum 2 jam emisi atau didinginkan pada suhu 4 ° C selama maksimum 24 jam.

Menabur sampel urin

Sampel urin harus diencerkan 1:50.

Untuk pengenceran, tempatkan 0,5 ml urin pasien dan encerkan dengan 24,5 ml larutan fisiologis steril.

Ukur 0,1 ml urin encer dan tabur per permukaan dengan spatula drigalski pada media CLED. Ini adalah metode pembenihan yang diindikasikan untuk menghitung koloni. Itu sebabnya digunakan dalam sampel urin, karena hasilnya harus dinyatakan dalam CFU / ml.

Untuk kuantifikasi koloni yang diperoleh, lakukan sebagai berikut: hitung koloni piring dan kalikan dengan 10 kemudian dengan 50. Dengan cara ini Anda mendapatkan jumlah CFU / ml urin.

Interpretasi

Menghitung di atas 100.000 CFU / ml - Infeksi saluran kemih di Indonesia

Menghitung di bawah 1000 CFU / ml- Tidak ada infeksi

Menghitung antara 1000-10.000 CFU / ml - Diragukan, kemungkinan kontaminasi, pengambilan sampel berulang.

Identifikasi

Koloni yang ditanam pada agar CLED harus dibuat Gram dan tergantung pada karakteristik morfotipe mikroorganisme subkultur tertentu dilakukan.

Sebagai contoh, jika itu adalah basil Gram negatif, ia akan ditaburkan pada agar MacConkey, di mana fermentasi atau bukan dari laktosa dikuatkan. Selain itu, agar bergizi melekat untuk melakukan tes oksidase.

Dalam hal Gram mengungkapkan cocci Gram positif dapat disubkultur dalam agar manitol asin dan agar agar bernutrisi. Dalam yang terakhir, uji katalase dilakukan. Akhirnya, jika ragi diamati, itu akan ditaburkan di agar Sabouraud.

Banyak laboratorium menghindari penggunaan media CLED dan lebih memilih untuk hanya menggunakan agar darah, MacConkey dan agar nutrisi untuk menabur sampel urin.

Persiapan

Dalam botol dengan satu liter air suling, larutkan 36,2 gr agar-agar CLED bubuk. Setelah 5 menit istirahat, hangatkan agar-agar yang diresuspensi, campur terus-menerus sampai mendidih selama 1 menit.

Kemudian sterilkan pada 121 ° C selama 15 menit dalam autoklaf. Setelah waktu berakhir, ia dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan dingin hingga mencapai suhu 45 ° C. Selanjutnya disajikan antara 15 - 20 ml di setiap cawan Petri steril.

Prosedur penyajian pelat harus dilakukan di dalam tudung aliran laminar atau di depan pembakar Bunsen untuk menghindari kontaminasi.

Piring yang disajikan diizinkan untuk dipadatkan, dipesan dalam wadah piring terbalik dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.

PH akhir dari media yang disiapkan harus 7,3 ± 0,2.

Referensi

  1. Rekomendasi untuk diagnosis mikrobiologis infeksi saluran kemih. anak kecil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Tersedia di: scielo.org.
  2. Panchi J. Identifikasi agen mikroba yang menyebabkan infeksi saluran kemih pada pasien internal yang menjalani kateterisasi kandung kemih. 2016. Pekerjaan Sarjana untuk melamar gelar Lisensi di Laboratorium Klinik. Universitas Teknis Ambato. Ekuador.
  3. Laboratorium Britania. Setengah CLED. Tersedia di: britanialab.com.
  4. Laboratorium Renylab Instruksi penggunaan, CLED Agar. 2013 Tersedia di: www.renylab.ind.br.
  5. Laboratorium yang Dibudidayakan Manual dasar Mikrobiologi. Tersedia di: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Pilihan agar CLED dalam rutinitas kultur urin. Evaluasi prospektif dan komparatif. Diagnostic Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.