Simmons citrate agar, persiapan dan penggunaan



itu Simmons Citrate agar Ini adalah media padat yang digunakan sebagai tes biokimia untuk mengidentifikasi mikroorganisme, terutama basil Gram-negatif. Media asli diciptakan oleh Koser pada tahun 1923.

Medium Citrate Koser terdiri dari kaldu yang mengandung natrium fosfat, amonium fosfat, monopotassium fosfat, magnesium sulfat, dan natrium sitrat..

Seperti dapat dilihat, satu-satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah amonium fosfat, protein dan karbohidrat dihilangkan sebagai sumber unsur-unsur ini, mereka biasanya ada di media lain..

Karena itu, bakteri yang diinokulasi dalam medium itu hanya dapat bereproduksi jika mampu mengambil karbon sitrat. Tes ini positif jika ada kekeruhan dalam medium, tetapi memiliki kelemahan bahwa kekeruhan non-spesifik dapat terjadi.

Masalah ini diselesaikan dengan Simmons menambahkan agar dan bromothymol blue ke formula asli Koser. Meskipun prinsipnya sama, namun interpretasinya berbeda.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Mode pembibitan
    • 1.2 Interpretasi
  • 2 Persiapan
  • 3 Gunakan
  • 4 Pertimbangan akhir
    • 4.1 Inokulum
    • 4.2 Diunggulkan
    • 4.3 Intensitas warna
  • 5 Referensi

Yayasan

Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk bertahan hidup tanpa adanya fermentasi atau produksi asam laktat, perlu mendapatkan energi melalui penggunaan substrat lain. Dalam tes ini satu-satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.

Bakteri yang mampu bertahan dalam kondisi ini memetabolisme sitrat dengan cepat melalui alternatif rute tradisional, menggunakan siklus asam tricarboxylic atau siklus fermentasi sitrat.

Katabolisme sitrat oleh bakteri terdiri dari mekanisme enzimatik tanpa intervensi koenzim A. Enzim ini dikenal sebagai citricase (citrate oxaloacetate-lyase) atau citrate desmolase. Reaksi membutuhkan kehadiran kation bivalen, yang dalam hal ini disuplai oleh magnesium.

Reaksi ini menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asam organik di tengah pH basa yang dibentuk oleh penggunaan sumber nitrogen. Asam-asam organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, selanjutnya membuat alkalisasi medium.

Mode menabur

Media simmons sitrat harus diinokulasi secara ringan ke dalam ekor ikan menggunakan loop lurus atau jarum, dan diinkubasi selama 24 jam pada 35-37 ° C. Pada akhir waktu hasilnya diamati.

Pembibitan hanya dilakukan pada permukaan agar-agar. Jangan melakukan tusukan.

Interpretasi

Jika medianya berwarna asli (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang terlihat, tesnya negatif, tetapi jika medianya berubah menjadi biru, ini mengindikasikan keberadaan produk alkali, yang dideteksi oleh indikator pH. Dalam hal ini tesnya positif.

Ini terjadi karena jika bakteri menggunakan karbon sitrat, ia juga mampu mengambil nitrogen amonium fosfat yang dengannya ia melepaskan amonia, membuat alkali media.

Di sisi lain, jika pertumbuhan bakteri diamati dalam medium, tetapi tidak ada perubahan warna, tes juga harus dianggap positif, karena jika ada pertumbuhan itu berarti bakteri dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon, meskipun tidak ada perubahan pH saat ini (kadang-kadang mungkin diperlukan).

Jika ada keraguan dalam interpretasi warna akhir, dapat dibandingkan dengan tabung sitrat yang tidak diinokulasi.

Persiapan

Timbang 24,2 gr medium kering untuk satu liter air. Campur dan diamkan selama kurang lebih 5 menit. Selesaikan media dengan memanaskan selama 1 atau dua menit, aduk terus.

Sajikan 4 ml dalam tabung reaksi dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Saat meninggalkan autoklaf, miringkan dengan bantuan penopang sedemikian rupa sehingga agar mengeras dalam bentuk puncak seruling dengan sedikit cleat atau bottom dan lebih banyak bevel.

PH akhir media sitrat adalah 6,9 (hijau). Media ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.

Pada pH 6 atau di bawahnya, media berubah menjadi kuning. Warna ini tidak diamati dalam pengujian dengan bakteri.

Dan pada pH 7,6 atau lebih tinggi, medium berubah menjadi biru Prusia yang intens.

Gunakan

Simmons citrate agar digunakan untuk identifikasi mikroorganisme tertentu, terutama basil yang termasuk dalam keluarga Enterobacteriaceae dan basil glukosa-non-fermentasi lainnya..

Pertimbangan terakhir

Media simmons sitrat adalah tes yang sangat rumit, karena positif palsu dapat diperoleh jika kesalahan tertentu dibuat.

Perawatan yang harus diambil adalah sebagai berikut:

Inokulum

Jangan membuat inokulum bakteri yang sangat tebal atau penuh, karena dapat menyebabkan warna kuning tembaga berkembang di lokasi penanaman, tanpa memengaruhi media lainnya, tetapi hal itu dapat menimbulkan keyakinan bahwa ada pertumbuhan. Hal yang sama tidak berarti tes positif.

Demikian juga, inokulum yang tebal dapat menghasilkan false positive, karena senyawa organik yang terbentuk sebelumnya di dalam dinding sel bakteri yang sekarat dapat melepaskan cukup karbon dan nitrogen untuk mengubah indikator pH..

Karena itu, yang ideal adalah menanam dengan menggunakan jarum alih-alih pegangan platinum, untuk menghindari pengambilan bahan berlebih.

Ditaburkan

Di sisi lain, ketika baterai tes biokimia ditanam untuk identifikasi mikroorganisme yang bersangkutan, penting bahwa uji sitrat menjadi yang pertama diinokulasi, untuk menghindari seretan protein atau karbohidrat dari media lain..

Dalam keadaan ini adalah mungkin untuk mendapatkan false positive, karena salah satu dari zat-zat yang diperkenalkan secara tidak sengaja ini akan dimetabolisme dan menyebabkan perubahan pH.

Cara lain untuk menghindari hambatan zat adalah dengan membakar pegangan dengan baik dan mengambil inokulum baru antara satu tes dan lainnya.

Perawatan juga harus diambil ketika menyentuh koloni untuk melakukan inokulum, karena itu harus dihindari untuk menarik bagian agar-agar dari kultur dari mana bakteri berasal, karena dijelaskan sebelumnya.

Dalam pengertian ini, Matsen, Sherris dan Branson merekomendasikan untuk mengencerkan inokulum dalam larutan fisiologis sebelum menginokulasi uji sitrat untuk menghindari transfer sumber karbon lainnya..

Intensitas warna

Harus diperhitungkan bahwa intensitas warna yang dihasilkan ketika tes positif dapat bervariasi sesuai dengan rumah komersial.

Selain itu, ada mikroorganisme yang dites positif pada 24 jam, tetapi ada strain lain yang membutuhkan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan pH..

Referensi

  1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  4. Laboratorium BD BBL Simmons Sitrat Agar Miring. 2015. Tersedia di: bd.com
  5. Laboratorium Britania. Simmons Citrate Agar. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  6. Laboratorium Diagnostik Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Tersedia di: andinamedica.com.