Foundation, penggunaan dan persiapan cokelat agar



itu agar coklat ini adalah media kultur yang solid, diperkaya, non-selektif dan non-diferensial. Ini digunakan terutama untuk isolasi mikroorganisme yang dituntut dari sudut pandang gizi, meskipun dapat menumbuhkan semua jenis bakteri..

Itulah sebabnya kegunaannya meningkat terutama dalam penyemaian sampel yang biasanya steril, seperti CSF dan cairan sendi. Meskipun juga termasuk dalam cara yang dipilih untuk menabur sampel polimikroba, tetapi dalam kasus ini perlu untuk menambahkan antibiotik yang menghambat flora bersamaan..

Media ini memiliki karakteristik warna coklat yang sangat mirip dengan cokelat, karenanya namanya. Sediaan ini sangat mirip dengan agar darah, hanya saja dalam hal ini darah harus dipanaskan agar sel darah merah pecah.

Persiapannya, seperti agar darah, sangat halus, karena mudah terkontaminasi. Untuk alasan ini banyak laboratorium lebih memilih untuk memperoleh media ini yang sudah disiapkan oleh rumah komersial yang menjamin kualitasnya.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Penggunaan
    • 2.1 Agar coklat disiapkan dengan agar Columbia
    • 2.2 Agar coklat disiapkan dengan agar-agar dasar GC (untuk gonokokus)
    • 2.3 Agar coklat disiapkan dengan agar Müeller Hinton
    • 2,4 Agar coklat disiapkan dengan agar Thayer Martin
  • 3 Persiapan
    • 3.1 Perhitungan
    • 3.2 Timbang dan larutkan
    • 3.3 Sterilkan
    • 3.4 Penggumpalan darah
    • 3.5 Cara lain untuk menyiapkan agar coklat tanpa menggunakan darah
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Media ini terdiri dari basis agar-agar yang kaya akan nutrisi dan darah yang dipanaskan. Hemolisis sel darah merah menyediakan faktor X (hemin) dan faktor V (NAD), yang diperlukan untuk pertumbuhan beberapa mikroorganisme, seperti genus. Haemophilus. Ini juga sangat berguna untuk isolasi Neisserias sp.

Seperti agar darah, media yang berbeda dapat digunakan sebagai agar agar tergantung pada kebutuhan. Di antara media yang digunakan adalah infus jantung otak dan agar kedelai trypticase, meskipun yang paling direkomendasikan adalah agar Columbia, Müeller Hinton, agar-agar GC dan agar-agar Thayer Martin..

Beberapa varian agar coklat termasuk suplemen diperkaya yang tersedia secara komersial yang disebut Isovitalex atau Polivitex.

Suplemen ini mengandung vitamin B12, L-glutamin, adenin, guanin hidroklorida, asam p-aminobenzoat, nikotinamida adenin dinukleotida (NAD), tiamin pirofosfat, besi nitrat, tiamin hidroklorida, sistein hidroklorida, sistein hidroklorida, L-sistin dan glukosa.

Penting untuk dicatat bahwa agar coklat lebih diperkaya daripada agar darah, tetapi tidak memungkinkan pengamatan pola hemolisis.

Penggunaan

Agar coklat disiapkan dengan agar Columbia

Media ini mengandung kasein dan pankreas jantung yang dicerna, peptida daging yang dicerna, natrium klorida, agar, ekstrak ragi dan pati jagung. Ini juga kaya akan vitamin, mineral dan asam amino esensial.

Basa ini dengan darah yang dipanaskan sangat ideal untuk isolasi bakteri dari genus Neisseria. Di sisi lain, jika suplemen untuk Brucella ditambahkan ke media, mikroorganisme tersebut dapat diisolasi. Hasilnya ditingkatkan menggunakan darah kuda.

Agar coklat disiapkan dengan agar-agar dasar GC (untuk gonokokus)

Media ini mengandung pepton, tepung jagung, buffer monobasa dan dibasa, natrium klorida dan agar.

Kebanyakan presentasi agar coklat yang disiapkan secara komersial datang dengan basa ini dan tidak mengandung darah yang dipanaskan, tetapi campuran sintetis dari hemin dan suplemen kimia dari faktor pertumbuhan, vitamin, mineral, asam amino, faktor V dan glukosa..

Agar coklat disiapkan dengan agar Müeller Hinton

Ini digunakan untuk melakukan uji kepekaan antimikroba dari mikroorganisme yang menuntut, seperti Streptococcus pneumoniae menggunakan 5% darah ram yang dipanaskan.

Ini juga berfungsi untuk isolasi utama Neisserias dan Haemophilus, tetapi dalam kasus khusus isolasi Haemophilus penggunaan darah kuda lebih disukai, karena merupakan sumber yang kaya faktor X dan V.

Di sisi lain, jika sampel yang akan ditabur berasal dari daerah yang tidak steril, penambahan antibiotik dianjurkan untuk menghambat flora normal di daerah tersebut..

Contoh untuk sampel pernapasan yang diduga mengandung bakteri Haemophilus Bacitracin digunakan untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus dan Saphirytic Neisseria.

Dalam kasus sampel chancre genital, di mana diduga Haemophilus ducreyi, Agar coklat yang disiapkan dengan cara berikut telah berhasil digunakan: Agar Müeller-Hinton dengan 5% darah kuda coklat, pengayaan Isovitalex 1% dan vankomisin 3 μg / ml.

Agar coklat disiapkan dengan agar Thayer Martin

Media ini khusus untuk isolasi Neisseria gonorrhoeae. Itu harus mengandung antibiotik untuk menghambat flora yang menyertainya. Darah domba digunakan.

Persiapan

Indikasi untuk persiapan agar agar digunakan harus dilihat. Mereka berada di belakang paket media dehidrasi. Mereka biasanya menggambarkan berapa yang harus ditimbang untuk menyiapkan satu liter media kultur.

Di laboratorium Anda dapat menyiapkan jumlah persis yang dibutuhkan, bisa lebih atau kurang dari satu liter.

Perhitungan

Aturan tiga dibuat untuk menghitung berapa yang harus ditimbang untuk menyiapkan volume yang diinginkan. Contoh:

Jika untuk 1 liter perlu ditimbang 40 gr dan laboratorium membutuhkan 800 ml, dikatakan:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Rumusnya adalah sebagai berikut:

X = 32 gr (jumlah yang ditimbang 800 ml).

Timbang dan larut

Kami terus menimbang jumlah yang diperlukan dan menempatkannya di fiola dengan air.

Panaskan sampai panas sedang dan aduk perlahan dengan gerakan berputar sampai media yang dehidrasi benar-benar larut, biarkan mendidih selama 1 menit..

Sterilkan

Fiola dimasukkan ke dalam autoklaf untuk mensterilkan medium pada 121 ° C selama 20 menit.

Agregat darah

Ketika meninggalkan autoklaf, ia dibiarkan diam sampai suhu medium kira-kira antara 56 hingga 70 ° C untuk menempatkan darah dan bercampur sampai media berubah warna menjadi coklat..

Jika Anda akan menambahkan suplemen, inilah saatnya untuk melakukannya. Selanjutnya, campur dan sajikan 20 ml untuk setiap cawan Petri steril.

Seluruh prosedur harus dilakukan dalam tudung aliran laminar atau sekitar pembakar Bunsen.

Diamkan sampai mereka mengeras dan tetap terbalik di lemari es.

Cara lain untuk menyiapkan agar coklat tanpa menggunakan darah

Media dasar dibuat seperti yang dijelaskan di atas, hemoglobin dehidrasi yang diperoleh secara komersial dilarutkan dan disterilkan dalam autoklaf.

Kedua solusi dibiarkan dingin hingga 50 ° C, bergabung dan tambahkan suplemen. Campur dalam kondisi aseptik dan kemudian sajikan dalam cawan petri steril.

Kontrol kualitas

Penting bahwa darah ditempatkan pada suhu yang ditunjukkan, karena itu adalah ideal untuk melisiskan sel darah merah dan pada saat yang sama mempertahankan faktor V yang termosensitif.

Seharusnya tidak ada gelembung di permukaan agar-agar. Setiap batch 100 piring harus diinkubasi satu atau dua piring di kompor pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk memeriksa sterilitasnya..

Untuk hasil terbaik, agar coklat harus digunakan segera setelah persiapan.

Kontrol strain bakteri harus diambil di laboratorium untuk mengevaluasi kemanjuran medium yang baru disiapkan untuk pertumbuhan mikroorganisme utama yang menuntut kepentingan klinis..

Referensi

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Kelayakan penggunaan media kultur dasar GC-Biocen Agar di Laboratorium Mikrobiologi. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Tersedia di: scielo.sld.
  5. Kontributor Wikipedia. Agar coklat. Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 17 Desember 2018, 19:54 UTC. Tersedia di: en.wikipedia.org.