Yayasan Agar BHI, persiapan dan penggunaan



itu BHI agar atau agar Brain Heart Infusion adalah media kultur padat bergizi. Dalam bahasa Spanyol kami menyebutnya sebagai agar infus jantung otak. Ini adalah media kultur non-selektif, yang berarti bahwa semua jenis bakteri Gram positif dan Gram negatif dapat dikembangkan, serta beberapa ragi dan jamur berfilamen.

Ini terdiri dari infus otak dan jantung sapi, hidrolisat peptik jaringan hewan, hidrolisat kasein pankreas, natrium klorida, glukosa, disodium fosfat, dan agar.

Perlu dicatat bahwa agar BHI adalah salah satu media kultur yang paling sering di laboratorium bakteriologi. Ini dapat digunakan tanpa suplemen sebagai kultur utama, subkultur koloni yang diperoleh dalam media selektif lain atau untuk pemeliharaan strain di laboratorium.

Di sisi lain, itu adalah media yang ideal untuk digunakan sebagai dasar dalam persiapan media yang diperkaya, seperti agar darah dan agar coklat. Keduanya ideal untuk mengisolasi jasad renik dari sudut pandang gizi. Namun, harus diperhitungkan bahwa karena mengandung glukosa, tidak cukup untuk mengamati pola hemolisis.

Demikian juga, agar BHI dapat digunakan untuk persiapan alat khusus untuk isolasi mikroorganisme patogen dari pertumbuhan yang sulit di media umum, di antaranya: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae dan Histoplasma capsulatum.

Dengan antibiotik BHI agar menjadi media selektif untuk isolasi jamur.

Indeks

  • 1 Yayasan
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Wedges
    • 2.2 Pelat
    • 2.3 Persiapan agar darah
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Gunakan tanpa suplemen
    • 3.2 Sebagai agar dasar untuk persiapan media lain
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Referensi

Yayasan

Ini adalah media kultur bergizi untuk mengisolasi mikroorganisme yang cukup menuntut, mampu meningkatkan pengayaannya dengan penambahan darah dan suplemen nutrisi lainnya..

Ini adalah media kultur non-selektif, oleh karena itu memungkinkan pertumbuhan sebagian besar bakteri Gram positif dan Gram negatif, serta beberapa jamur. Namun, bisa menjadi selektif dengan penambahan antibiotik.

Media mengandung infus otak dan jantung betis, hidrolisat peptida dari jaringan hewan dan hidrolisat kasein pankreas; semua senyawa ini bertindak sebagai sumber vitamin, asam amino, nitrogen, dan karbon.

Glukosa adalah karbohidrat yang menyediakan energi bagi mikroorganisme begitu mereka telah difermentasi. Sedangkan natrium klorida dan disodium fosfat mempertahankan keseimbangan osmotik dan memberikan pH mendekati netralitas. Akhirnya, agar memberikan konsistensi padat pada medium.

Persiapan

Timbang 52 gram media kering dan larut dalam satu liter air suling. Bawa campuran ke sumber panas sampai mendidih, aduk terus selama proses pembubaran.

Anda dapat menyiapkan irisan atau piring agar BHI tanpa aditif.

Wedges

Untuk persiapan irisan, sajikan persiapan hingga mengisi setengah dari setiap tabung, tutup dan disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, ketika akan berbaring di atas pangkalan sampai membeku. Kemudian simpan di lemari es sampai digunakan.

Piring

Campuran terlarut diautoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, ketika dibiarkan dingin hingga 50 ° C dan 20 ml media disajikan dalam cawan Petri steril. Mereka dibiarkan mengeras, membalikkan dan menyimpannya dalam lemari es sampai digunakan. Biarkan piring mengambil suhu ruangan sebelum tanam.

PH medium harus 7,4 ± 0,2.

Media yang tidak disiapkan berwarna krem ​​dan disiapkan berwarna kuning muda.

Persiapan agar darah

Setelah mensterilkan media, dinginkan hingga suhu sekitar 45 hingga 50 ° C, saat ini tambahkan darah (50 ml), campur perlahan untuk menghomogenisasi dan secara aseptik sajikan 20 ml dalam setiap cawan Petri. Jika gelembung terbentuk di piring, nyala api pembakar harus dengan cepat melewati gelembung untuk menghilangkannya.

Demikian juga, media khusus dapat dibuat dengan menambahkan aditif yang sesuai ketika campuran mencapai suhu 45 hingga 50 ° C.

Mediumnya merah ceri.

Penggunaan

Gunakan tanpa suplemen

Agar BHI tanpa aditif berguna sebagai biakan primer dan untuk penanaman strain mikroorganisme murni yang sedang atau sedang menuntut untuk identifikasi selanjutnya.

Karena merupakan media berwarna terang, sangat ideal untuk mengamati pigmen dan juga karena tidak mengandung zat yang mengganggu, dapat digunakan untuk melakukan tes biokimia, seperti oksidase dan katalase, atau untuk memasang tes biokimia lain dari koloni yang berasal dari ini. agar-agar.

Demikian juga, BHI agar wedges banyak digunakan untuk pemeliharaan strain untuk waktu yang ditentukan di laboratorium (bacterioteca).

Pelat atau irisan yang ditanam di permukaan dengan strain bakteri diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam. Sedangkan pada jamur suhu dan waktu inkubasi akan tergantung pada jenis jamur yang dicari.

Sebagai dasar agar untuk persiapan media lain

Dengan basis ini bisa disiapkan media yang diperkaya dan selektif.

Diperkaya

Fungsi utamanya adalah untuk berfungsi sebagai dasar dalam persiapan agar darah untuk penggunaan rutin di laboratorium mikrobiologi. Terutama, basis BHI kondusif untuk isolasi strain Streptococcus sp. Namun, memiliki kelemahan yaitu tidak cocok untuk pengamatan pola hemolisis karena mengandung glukosa.

Ini juga digunakan dalam persiapan kelinci atau agar darah kuda untuk isolasi Haemophilus sp. Untuk hasil yang lebih baik, Anda dapat menambahkan suplemen pengayaan (IsoVitaleX).

Jika sampel berasal dari saluran pernapasan ke agar, bacitracin dapat ditambahkan untuk menghambat flora yang menyertainya dan meningkatkan kemungkinan pemulihan strain Haemophilus sp.

Di sisi lain, agar darah (domba atau manusia) dapat disiapkan dengan sistin tellurite untuk diisolasi Corynebacterium diphtheriae. Demikian juga, berguna untuk membuat agar darah kelinci, dengan penambahan sistin dan glukosa untuk isolasi Francisella tularensis.

Pembibitan pelat agar darah dilakukan dengan kelelahan dan diinkubasi pada 35-37 ° C selama 24-48 jam dalam mikroaerofilik (5-10% CO)2).

Selektif

Media ini dengan tambahan antibiotik dapat menggantikan Sabouraud agar untuk isolasi jamur.

Kombinasi agar BHI dengan kloramfenikol - gentamisin atau penisilin -, streptomisin dan darah kuda sangat ideal untuk isolasi Histoplasma capsulatum.

Tergantung pada mikroorganisme yang akan diisolasi, inkubasi pada 35-37 ° C atau pada suhu kamar dalam aerobiosis dianjurkan. Kadang-kadang diperlukan inkubasi di kedua rentang suhu, menggunakan 2 piring untuk ini.

Beberapa jamur suka Trichophyton mentagrophytes mereka harus diinkubasi pada suhu kamar hingga 7 hari.

Kontrol kualitas

Dari setiap batch yang disiapkan, disarankan untuk menginkubasi 1 piring atau irisan pada suhu 37 ° C selama 24 jam dan memverifikasi bahwa tidak ada pertumbuhan; Terutama penting saat menyiapkan agar darah, karena merupakan media yang mudah terkontaminasi.

Di sisi lain, kualitas medium dapat dievaluasi dengan menginokulasi strain standar yang dikenal atau bersertifikat dan mengamati perkembangannya.

Dalam hal ini, untuk mengevaluasi agar BHI tanpa aditif, strain Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 atau Candida albicans ATCC 10231. Mereka diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam. Dalam semua kasus, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan.

Untuk mengevaluasi pelat agar darah, strain  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 atau Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Strain bakteri diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam microaerophilicus selama 24 jam, sedangkan jamur diinkubasi pada suhu kamar dalam ruang lembab hingga 7 hari. Dalam semua kasus, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan.

Referensi

  1. Laboratorium Britania. Agar Infus Jantung Otak. 2015. Tersedia di: britanialab.com.
  2. Laboratorium BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tersedia di: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Agar Infus Jantung Otak. 2009.
  4. Laboratorium neogen. Agar Infus Jantung Otak. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar darah: pondasi, penggunaan dan persiapan. 2018. Tersedia di: lifeder.com.
  6. Kontributor Wikipedia. Infus jantung otak Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 19 September 2018, 03:58 UTC. Tersedia di: wikipedia.org. Diakses 2 Maret 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.