Baird Parker Agar pondasi, persiapan dan penggunaan



itu Agar Baird Parker itu adalah media kultur yang solid, selektif dan diferensial. Itu dibuat pada tahun 1962 untuk deteksi dan penghitungan Staphylococcus positif koagulase (Staphylococcus aureus).

Ini terdiri dari hidrolisat kasein pankreas, ekstrak daging, ekstrak ragi, litium klorida, glisin, natrium piruvat, kalium telurium, agar dan emulsi kuning telur.

Agar Baird Parker didasarkan pada kemampuan S. aureus mengurangi telurium dan memproduksi lesitinase. Kedua sifat menghasilkan koloni dengan karakteristik spesifik untuk spesies ini. Oleh karena itu, ia menawarkan efektivitas besar dalam mendeteksi mikroorganisme ini.

Koloni khas Indonesia S. aureus mereka berwarna hitam atau abu-abu gelap, dengan batas tidak berwarna dan lingkaran cahaya yang mengelilingi mereka, membedakan diri dari sisa mikroorganisme. Patogen ini dapat ditemukan dalam sampel klinis, perairan, kosmetik, dan makanan mentah atau yang dimasak.

Diagnosis atau pendeteksiannya sangat penting, karena beragamnya patologi yang dihasilkannya, seperti keracunan makanan, sindrom kulit melepuh, sindrom syok toksik, abses, meningitis, septikemia, endokarditis, dan lain-lain..

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kekuatan gizi
    • 1.2 Selektif
    • 1.3 Diferensial
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Emulsi kuning telur
    • 2,2 Kalium telurium pada 1% b / v
    • 2.3 Persiapan media kultur
  • 3 Gunakan
    • 3.1 Sampel klinis
    • 3.2 Sampel makanan
    • 3.3 Sampel air
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Rekomendasi
  • 6 Referensi

Yayasan

Kekuatan bergizi

Hidrolisat kasein pankreas, ekstrak daging dan ekstrak ragi adalah sumber nutrisi, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pengembangan mikroba umum, sedangkan piruvat dan glisin adalah senyawa yang mendukung pertumbuhan spesifik Staphylococcus aureus.

Selektif

Agar Baird Parker selektif karena mengandung zat yang menghambat pertumbuhan flora yang menyertainya, sementara mempromosikan pengembangan S. aureus. Senyawa penghambat adalah litium klorida dan kalium tellurit.

Diferensial

Ini berarti memungkinkan untuk membedakan S. aureus dari sisa Staphylococci negatif koagulase. S. aureus memiliki kemampuan untuk mengurangi telurium menjadi telurium bebas logam hitam, membentuk koloni hitam atau abu-abu gelap.

Demikian juga, kuning telur menyediakan substrat untuk membuktikan keberadaan enzim lecithinase dan lipase. S. aureus itu adalah lesitinase positif dan oleh karena itu halo yang jernih akan diamati di sekitar koloni, yang menunjukkan bahwa lesitin dihidrolisis.

Dalam pengertian ini, penampilan dalam agar-agar dari koloni-koloni hitam atau abu-abu gelap ini terang dengan lingkaran cahaya di sekitar menunjukkan keberadaan S. aureus. 

Jika zona presipitasi terbentuk, itu menandakan bahwa ada aktivitas lipase. Beberapa strain S. aureus mereka adalah lipase positif dan negatif lainnya.

Jika itu terjadi S. aureus Jika lipase positif, zona buram akan diamati di sekitar koloni hitam atau abu-abu gelap, dan kemudian halo yang jernih karena aksi lesitinase..

Koloni bakteri selain S. aureus mampu tumbuh di media ini akan mengembangkan koloni tidak berwarna atau coklat, tanpa lingkaran halo.

Koloni hitam atipikal juga dapat diamati dengan atau tanpa batas berwarna, tetapi tanpa lingkaran cahaya yang jelas. Koloni-koloni ini seharusnya tidak diperhitungkan, mereka tidak sesuai S. aureus.

Persiapan

Emulsi kuning telur

Ambil telur ayam segar, cuci bersih dan letakkan 2 hingga 3 jam dalam alkohol 70%. Kemudian, telur terbuka secara aseptik dan putih telur dipisahkan dengan hati-hati dari kuning telur. Setelah itu 50 ml kuning telur diambil dan dicampur dengan 50 ml larutan fisiologis steril.

Potassium tellurite pada 1% b / v

Beberapa rumah komersial menjual 1% kalium telurium yang siap digunakan. Ini ditambahkan ke media sebelum media mengeras.

Untuk menyiapkan larutan ini di laboratorium timbang 1,0 g kalium telurium dan larut dalam air. Selanjutnya jumlah air diselesaikan hingga 100 ml. Solusinya harus disterilkan dengan metode filtrasi.

Persiapan media kultur

Timbang 60 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 940 ml air suling. Biarkan campuran diam selama sekitar 5 hingga 10 menit.

Oleskan panas dengan mengaduk media secara teratur untuk meningkatkan proses disolusi. Biarkan mendidih sebentar. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Diamkan hingga mencapai suhu 45 ° C dan tambahkan 50 ml emulsi kuning telur dan 10 ml telur tellurite 1%. Aduk rata dan sajikan 15 hingga 20 ml pada cawan petri steril.

Biarkan mengeras, pesan terbalik dalam plakat dan simpan di lemari es sampai digunakan.

PH akhir dari media yang disiapkan harus pada 6,8 ± 0,2.

Sebelum menanam sampel, tunggu sampai piring mengambil suhu sekitar. Menabur piring dengan pergoresan atau dengan menabur di permukaan dengan Drigalski spatula.

Warna media dehidrasi adalah cokelat muda dan warna media disiapkan adalah kuning muda.

Gunakan

Sampel klinis

Sampel klinis diunggulkan secara langsung dengan mengeluarkan bagian dari bahan di salah satu ujung pelat, dan dari sana striate karena kelelahan. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C.

Sampel makanan

Timbang 10 g sampel makanan dan dihomogenisasi dalam 90 ml air peptonated 0,1%, pengenceran disiapkan dari sana, jika perlu. Menyuntik piring dalam rangkap tiga dengan 0,3 ml larutan yang disiapkan, dan menabur di permukaan dengan spatula Drigalski. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C.

Metodologi ini memungkinkan untuk menghitung koloni khas yang diperoleh dan sangat ideal ketika keberadaan S. aureus di atas 10 CFU per g / ml sampel.

Jika Anda curiga jumlahnya S. aureus itu kecil atau ada banyak flora yang menyertainya, disarankan untuk memperkaya sampel dalam kaldu kedelai tripticase dengan 10% NaCl dan 1% natrium piruvat. Ini akan mendukung pertumbuhan S. aureus dan akan menghambat perkembangan flora yang menyertainya. Tabung yang berawan akan diunggulkan di agar Baird Parker.

Sampel air

Dalam sistem penyaringan vakum dan disterilkan, 100 ml air disaring, dan kemudian membran mikropor 0,4 mikron dihilangkan dengan penjepit steril dan ditempatkan di atas pelat Baird Parker. Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada 35-37 ° C. Teknik ini memungkinkan penghitungan koloni tipikal S. aureus.

Kontrol kualitas

Untuk mengevaluasi kualitas agar Baird Parker, strain yang dikenal dapat digunakan, seperti Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Dalam kasus strain S. aureus ATCC dikenal untuk mengurangi telurium, dan mereka adalah lipase dan lesitinase positif. Oleh karena itu harus ada perkembangan yang memuaskan dan menumbuhkan koloni cembung dengan pusat hitam dan tepi tidak berwarna, dengan lingkaran cahaya buram dan lingkaran cahaya lain yang lebih eksternal jelas.

Di sisi lain, S. epidermidis perkembangan yang buruk diharapkan dalam media ini, dengan koloni keabu-abuan ke coklat, tidak ada halo yang jelas.

Untuk E. coli dan P. mirabilis diharapkan dihambat total atau sebagian. Jika tumbuh, koloni coklat akan berkembang tanpa zona buram, atau halo yang jernih.

Rekomendasi

-Media tidak harus dipanaskan setelah menambahkan telurium dan kuning telur.

-Penyiapan emulsi kuning telur dan penambahannya dalam medium merupakan langkah kontaminasi yang sangat rentan. Harus sangat berhati-hati.

-Jika ada keberadaan koloni khas S. aureus harus dikuatkan dengan memasang uji koagulase pada strain tersebut.

-Jika ada hasil yang meragukan dengan koagulase, tes konfirmasi lainnya harus dipasang.

-Hati-hati untuk tidak membingungkan keberadaan koloni khas S. aureus dengan koloni atipikal warna hitam.

Referensi

  1. Kontributor Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipedia, Ensiklopedia Gratis. 15 Maret 2017, 19:36 UTC. Tersedia di: wikipedia.org/ Diakses 18 Februari 2019.
  2. Laboratorium BD. Baird Parker Agar. 2006. Tersedia di: bd.com
  3. Laboratorium Britania. Bair agar-agar Parker. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  4. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Tersedia di: http://f-soria.es/Inform
  5. Laboratorium Britania. Tellurite kalium. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Membawa Staphylococcus aureus enterotoksigenik tipe A, pada apusan nasofaring pada penjamah makanan. Rev Med Chili 2017; 145: 1559-1564
  7. Covenin Standar Venezuela 1292-89. (1989). Makanan Isolasi dan penghitungan Staphylococcus aureus. Tersedia di:sencamer.gob.ve