Pondasi, persiapan, dan penggunaan MIO medium
itu setengah MIO adalah tes biokimia yang digunakan untuk membantu dalam identifikasi spesies bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae. Ini cukup bergizi dan terdiri dari glukosa, ekstrak ragi, pepton, triptein, L-ornithine hidroklorida, bromocresol ungu dan agar.
Arti akronimnya (MIO) menjelaskan masing-masing parameter yang dapat diamati dalam media ini; motilitas, indole dan ornithine. Motilitas adalah kemampuan mikroorganisme untuk bergerak dengan adanya flagela. Agar sifat ini dapat diamati, konsistensi media harus semi-padat, sehingga persiapan memiliki jumlah agar yang lebih sedikit..
Produksi indol membuktikan keberadaan enzim tryptophanase yang bekerja pada asam amino triptofan, karena itu diperlukan penggunaan reagen pengungkap untuk membuat produksi indol terlihat..
Akhirnya, ornithine menentukan apakah bakteri mampu mendekarboksilasi asam amino, yaitu, jika ia memiliki enzim orinithine decarboxylase.
Indeks
- 1 Yayasan
- 1.1 pepton, ekstrak ragi dan triptein
- 1.2 Motilitas
- 1.3 Glukosa
- 1.4 L-Ornithine
- Indikator 1,5 pH
- 2 Teknik pembibitan dan pengembangan
- 3 Persiapan
- 3.1 Media MIO
- 3.2 reagen Kovacs (pengembang uji Indole)
- 4 Gunakan
- 5 Kontrol kualitas
- 6 Referensi
Yayasan
Pepton, ekstrak ragi dan triptein
Elemen-elemen ini berkontribusi pada kekuatan nutrisi media ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrisi dan asam amino esensial untuk pengembangan bakteri.
Selain itu, triptein adalah sumber triptofan sebagai bukti keberadaan enzim triptofanase, yang menurunkan triptofan dengan deaminasi reduktif yang melepaskan indol, asam piruvat, amonia dan energi..
Indole tidak berwarna, sehingga keberadaannya terungkap dengan menambahkan lima tetes pereaksi Ehrlich atau Kovacs, keduanya dengan p-dimethylaminobenzaldehyde.
Kelompok aldehida dari senyawa ini bereaksi dengan indole, menghasilkan produk merah-fuchsia berbentuk cincin pada permukaan agar-agar.
Setiap jejak warna harus dianggap sebagai bukti positif. Tes harus segera dibaca, karena setelah beberapa saat warnanya menurun.
Di sisi lain, tes ini harus terungkap setelah mencatat hasil motilitas dan dekarboksilasi ornithine..
Interpretasi
Tes positif: pembentukan cincin merah fuchsia saat menambahkan tetes reagen Kovacs.
Tes negatif: tidak ada formasi cincin.
Motilitas
Kemampuan bakteri untuk bergerak akan dibuktikan jika media keruh diamati atau jika ada garis tebal pertumbuhan yang mengembang di sekitar inokulasi awal..
Tes motilitas negatif akan dibuktikan dengan mengamati garis tipis pertumbuhan, dan semua di sekitarnya akan tanpa pertumbuhan.
Adalah penting bahwa motilitas dibaca sebelum mengungkapkan indole, karena penambahan reagen menutupi seluruh media.
Pada bakteri yang bergerak tetapi tumbuh lambat, sulit untuk menunjukkan motilitasnya dengan media ini. Dalam hal ini disarankan untuk menggunakan tes atau metode lain, seperti media motilitas atau metode drop drop.
Glukosa
Glukosa adalah karbohidrat terfermentasi yang selain memberikan energi mengasamkan media, suatu kondisi yang diperlukan untuk dekarboksilasi asam amino ornithine terjadi.
Fermentasi glukosa harus selalu terjadi, berdasarkan pada prinsip bahwa semua bakteri milik keluarga fermentasi glukosa Enterobacteriaceae.
L-Ornithine
Jika bakteri menghasilkan enzim ornithine decarboxylase, ia dapat bertindak setelah media diasamkan dengan fermentasi glukosa..
Enzim ornithine decarboxylase bekerja pada gugus karboksil dari asam amino yang menghasilkan amina yang disebut putresin yang membuat alkali medium kembali.
Tes ini harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, karena jika Anda mencoba membaca sebelum Anda dapat salah menafsirkan tes dengan negatif palsu.
Harus diingat bahwa reaksi pertama yang terjadi adalah fermentasi glukosa, sehingga media berubah menjadi kuning pada fase awal (10 hingga 12 jam pertama). Jika dekarboksilasi ornithine selanjutnya terjadi, media akan berubah menjadi ungu.
Penting untuk menginterpretasikan uji dekarboksilasi ornithine sebelum mengungkapkan indole, karena penambahan reagen Kovacs memodifikasi warna medium.
Interpretasi
Tes negatif: kuning sedang atau dengan latar belakang kuning.
Tes positif: sepenuhnya ungu.
Indikator PH
Dalam hal ini bromocresol ungu digunakan; orang yang bertugas mengungkapkan ketika ada perubahan pH di tengah. Ketika diasamkan, indikator berubah menjadi kuning, dan ketika basa berubah menjadi ungu.
Benih dan teknik pengembangan
Untuk menanam media MIO, sebuah loop lurus atau jarum digunakan dan dengan itu sebagian koloni yang akan dipelajari dikumpulkan..
Tusukan dalam dibuat di media MIO dalam garis lurus. Tidak disarankan untuk melakukan tusukan ganda, karena dapat memberikan gambar motilitas yang salah jika tusukan tidak dilakukan di tempat yang sama..
Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Perhatikan hasil dalam urutan ini: motilitas, dekarboksilasi ornithine dan akhirnya mengungkapkan indole.
Dianjurkan untuk secara aseptik mengambil 2 ml media, memindahkannya ke tabung steril dan melakukan tes indol di sana, sehingga jika negatif, sisa tabung asli dapat diinkubasi selama 24 jam, untuk mengungkapkan indole lagi.
Pengembangan indole dilakukan dengan cara berikut: 3 sampai 5 tetes reagen Kovac ditambahkan ke media MIO dan diaduk dengan kuat. Diamati apakah cincin merah fuchsia muncul atau tidak.
Persiapan
Setengah MIO
Timbang 31 gr media MIO dan larutkan dalam satu liter air suling.
Panaskan sampai campuran mendidih selama satu menit, aduk terus sampai agar benar-benar larut. Distribusikan 4 ml media dalam 13/100 tabung reaksi dengan tutup kapas.
Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan biarkan berdiri tegak di rak, sedemikian rupa sehingga blok semi padat terbentuk.
Simpan dalam lemari es 2-8 ° C. Biarkan meredamnya sebelum menanam strain bakteri.
Warna medium yang didehidrasi berwarna krem dan medium disiapkan agak ungu.
PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,5 ± 0,2
Media berubah menjadi kuning dengan pH asam dan berwarna ungu pada pH basa.
Kovacs reagent (pengembang tes Indole)
Pereaksi ini dibuat sebagai berikut:
150 ml amil, isoamil atau butil alkohol (salah satu dari ketiganya) diukur. Di dalamnya 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde dilarutkan. Selanjutnya 50 ml asam klorida pekat ditambahkan perlahan.
Pereaksi yang disiapkan berwarna atau berwarna kuning muda. Itu harus disimpan dalam botol kuning dan disimpan di lemari es. Warna coklat tua menunjukkan kemundurannya.
Juga reagen Kovacs dapat digantikan oleh reagen Ehrlich. Yang terakhir, karena lebih sensitif, lebih disukai untuk mengungkap indol dalam bakteri yang memproduksinya dalam jumlah minimal, seperti pada beberapa basil non-fermentasi Gram negatif dan anaerob tertentu.
Gunakan
Media ini adalah tes yang melengkapi baterai tes biokimia untuk identifikasi bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae.
Data de-karboksilasi ornithine berfungsi untuk membedakan Shigella sonnei, yang memberi positif, dari Shigella boydii, Shigella flexneri dan S. dysenterieae, itu memberi negatif.
Ini juga membedakan genus Klebsiella, yang memberikan negatif, genus Enterobacter, di mana sebagian besar spesiesnya positif.
Kontrol kualitas
Setiap kali kumpulan media MIO disiapkan, uji kontrol dapat dilakukan. Untuk ini, strain yang dikenal atau bersertifikat digunakan untuk mengamati perilaku medium.
Strain yang bisa digunakan adalah Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes dan Proteus mirabilis.
Hasil yang diharapkan adalah E. coli dan M. morganii. Dan M: +, I: + dan O: +.
Klebsiella pneumoniae memberikan semua negatif (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis dan Enterobacter aerogenes dan M: + I: - dan O: +.
Referensi
- Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Laboratorium Britania. MIO Medio 2015. Tersedia di: britanialab.com
- Laboratorium BD BBL Motility Indole Ornithine Medium (MIO) Medium. 2007. Tersedia di: bd.com
- Laboratorium Valtek Sedang M.I.O. Motilitas, Indole, Ornithine. 2010. Tersedia di: andinamedica.com