Foundation lactosado broth, persiapan dan penggunaan
itu kaldu laktosa adalah cairan, media kultur non-selektif, digunakan terutama sebagai media pra-pengayaan dalam isolasi strain Salmonella dari analisis mikrobiologis yang dilakukan pada makanan olahan, produk susu atau air. Ini direkomendasikan oleh Komisi Internasional tentang Spesifikasi Mikrobiologis untuk Makanan (ICMPF).
Media mengandung pencernaan enzimatik gelatin, ekstrak daging dan laktosa, zat yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Selain itu laktosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi, sehingga beberapa coliform dapat membaginya dengan produksi gas.
Untuk alasan ini, kaldu laktosa direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk studi dugaan bakteri total dan fecal coliform, menjadikannya sebagai alternatif yang sangat baik untuk menggantikan kaldu lauryl sulfate triptose dengan teknik standar Most Most Likely Number (NMP). ), digunakan untuk analisis mikrobiologis dari sampel makanan, susu dan air permukaan, limbah bawah tanah, rekreasi, domestik dan industri.
Indeks
- 1 Yayasan
- 2 Persiapan
- 3 Penggunaan
- 3.1 Pra-pengayaan
- 3.2 Analisis total dan koliform tinja
- 4 Kontrol kualitas medium
- 5 Referensi
Yayasan
Untuk analisis mikrobiologis dari beberapa sampel, langkah pra-pengayaan sangat penting untuk dapat memulihkan mikroorganisme tertentu yang mungkin dalam jumlah yang sangat rendah atau dalam kondisi yang tidak menguntungkan yang melanggar atau meminimalkan kelayakannya..
Seperti halnya makanan kering dan olahan, mungkin terkontaminasi Salmonellas sp. Dalam kasus ini, jika ada bakteri, mereka telah menderita penganiayaan fisik dan kimia selama proses produksi produk..
Sedemikian rupa sehingga mikroorganisme terpapar pada faktor-faktor yang merugikan seperti dehidrasi, paparan produk penghambat atau beracun, dan tumpang tindih yang dihasilkan oleh kehadiran bakteri lain dalam jumlah yang lebih besar, antara lain..
Dalam pengertian ini, kaldu laktosa memiliki efek perbaikan pada struktur mikroorganisme yang rusak, menyebabkannya pulih dan bereproduksi, sedemikian rupa sehingga dapat dideteksi.
Demikian juga, kaldu laktosa memiliki kemampuan untuk melarutkan zat penghambat yang dapat mempengaruhi kelayakannya, memungkinkan pengembangannya. Selain itu, komposisi nutrisi kaldu laktosa sangat strategis untuk mendukung pertumbuhan Salmonella sp di atas mikroorganisme lainnya.
Untuk identifikasi akhir, harus dilakukan sub-budidaya terhadap sarana tanaman definitif lainnya.
Di sisi lain, komposisi medium juga memungkinkan mendeteksi mikroorganisme yang memfermentasi laktosa yang menghasilkan gas.
Persiapan
Untuk menyiapkan satu liter kaldu laktosa, timbanglah 13 gram media kering dan larutkan dalam 1000 ml air suling.
Untuk membantu melarutkan media dalam air, Anda bisa memanaskan larutan sedikit, tetapi tidak terlalu banyak..
Setelah homogen, solusinya disiapkan sebagai berikut: jika kaldu digunakan untuk mencari coliform, rak dengan tabung reaksi disiapkan, dan tabung fermentasi Durham dimasukkan terbalik.
Tabung Durham adalah detail yang sangat penting, karena akan memungkinkan untuk mendeteksi pembentukan gas, data berharga dalam mencari coliform.
Ketika tabung sudah siap, 10 ml kaldu laktosa disalurkan ke dalamnya, yang harus cukup untuk menutupi seluruh tabung Durham..
Jika kaldu laktosa akan digunakan sebagai kaldu pengayaan awal, tidak perlu menempatkan tabung fermentasi Durham. Dalam hal ini, dibutuhkan jumlah medium yang lebih besar (225 ml), yang akan disajikan dalam 500 ml botol, mulut lebar dan dengan tutup ulir yang tahan panas..
Selanjutnya, tabung atau tabung dibawa ke autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.
Media harus tetap pada pH akhir 6,9 ± 0,2 pada 25 ° C.
Anggur disimpan dalam lemari es sampai digunakan.
Sebelum digunakan, kaldu harus dihaluskan pada suhu kamar.
Di sisi lain, kaldu laktosa juga dapat disiapkan pada konsentrasi ganda.
Beberapa laboratorium menambahkan bromocresol ungu ke kaldu laktosa sebagai indikator pH, untuk menunjukkan tabung di mana ada fermentasi laktosa oleh perubahan warna. Dalam hal ini kaldu mengambil warna ungu dan jika fermentasi berubah menjadi kuning.
Penggunaan
Di laboratorium mikrobiologi kaldu laktosa banyak digunakan sebagai media yang relatif murah yang menawarkan hasil yang andal dan cepat (24-48 jam).
Ini dapat digunakan untuk analisis coliform total dan fecal dalam air dan makanan atau sebagai kaldu pengayaan untuk Salmonella.
Pra-pengayaan
Pra-pengayaan adalah langkah sebelum pengayaan sampel, yang sangat meningkatkan pemulihan bakteri dari genus Salmonella dalam makanan olahan.
Untuk melakukan ini, sampel makanan padat (25 gram) atau cairan (25 ml) diunggulkan dalam 225 ml kaldu laktosa, dan diinkubasi selama 24 hingga 48 jam. Selanjutnya, kalen sistin selenit atau kaldu tetrationat akan disubkultur dalam medium yang diperkaya. Kemudian diteruskan ke media selektif XLD dan SS.
Analisis coliform total dan fecal
Ini adalah cara yang sangat baik sebagai indikator kontaminasi tinja.
Oleh karena itu, kaldu laktosa sangat ideal untuk fase dugaan studi coliform dengan metode Most Probable Number.
Untuk sampel yang dicurigai memiliki jumlah besar coliform, jumlah yang lebih kecil dari coliform akan diinokulasi (1 ml), sedangkan untuk sampel yang diduga jumlah koliform yang lebih rendah, volume sampel yang lebih banyak diinokulasi (10 ml)..
10 pengenceran dibuat untuk analisis-1, 10-2, 10-3, membentuk baterai 3-5 tabung untuk setiap konsentrasi yang digunakan.
Dari setiap pengenceran, volume yang sama ditaburkan ke kaldu laktosa.
Tabung diinkubasi selama 24 jam. Kaldu yang negatif diinkubasi selama 24 jam lebih.
Interpretasi hasil dibuat dengan mengamati dua karakteristik: yang pertama adalah ada atau tidak adanya kekeruhan dan karena media ini tidak mengandung indikator pH, tidak akan ada perubahan warna..
Yang kedua adalah produksi atau bukan gas. Gas mudah ditunjukkan dalam tabung Durham, dengan munculnya satu atau lebih gelembung udara di dalamnya.
Itu dianggap positif jika kedua karakteristik diamati, yaitu, kekeruhan dengan produksi gas. Tabung positif harus ditanamkan kembali di media konfirmasi (kaldu Brilliant Green 2% Bile dan EC broth).
Kontrol kualitas medium
- Dalam persiapan medium penting untuk tidak lupa menempatkan tabung Durham jika tujuan yang sama adalah studi coliforms.
- Jangan memanaskan media terlalu lama sebelum sterilisasi.
- Distribusikan dalam tabung reaksi sebelum sterilisasi, tidak pernah setelahnya.
- Jangan gunakan jika media memiliki persiapan lebih dari 3 bulan.
- Jangan gunakan jika Anda melihat ada perubahan dalam karakteristik media yang biasa.
- Saat menyiapkan kaldu laktosa, ujilah kualitasnya dengan menanam strain yang dikenal sebagai Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii dan Klebsiella pneumoniae. Mereka tumbuh sangat baik, dengan produksi gas (kontrol positif).
- Itu juga bisa termasuk Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, yang tumbuh dengan baik, tetapi tanpa produksi gas (kontrol negatif).
- Perlu dicatat bahwa warna asli dari media dehidrasi adalah krem dan warna media disiapkan kuning yang sangat jelas dan transparan. Jika ada perubahan warna atau penampilan, mungkin ada kerusakan yang sama.
Referensi
- Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi dan mikrobiologi lingkungan. (2013) edisi pertama. Universitas Cartagenas, Kolombia.
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. (2009). Teknik untuk Analisis Mikrobiologis Makanan. 2nd ed. Fakultas Kimia, UNAM. Meksiko.
- Laboratorium Conda Pronadisa. 2017. Konsentrasi ganda kaldu laktosa (European Pharm.)
- Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Perbandingan teknik untuk ekstraksi bakteri coliform dari sedimen danau Xochimilco, Meksiko. Pdt. Argent. mikrobiol. 2013; 45 (3): 180-184. Tersedia di: scielo.org.
- Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Penentuan kualitas mikrobiologis perairan sumur artesis dari distrik di departemen Central, Cordillera, dan Capital.. Inst. Investig. Cienc. Kesehatan 2013; 11 (1): 5-14. Tersedia dari: scielo.iics.