Pondasi, persiapan dan penggunaan kaldu EC



itu EC broth atau kaldu Escherichia coli Ini adalah media kultur cair selektif. Media ini direkomendasikan oleh Metode Standar untuk penghitungan total dan fecal coliform, dengan teknik angka yang paling memungkinkan (NMP) dalam sampel air dan makanan, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Kaldu EC terdiri dari triptein, laktosa, garam empedu, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, natrium klorida dan air. Formulanya dirancang secara strategis untuk mendukung pertumbuhan coliform total dan fecal dan mencegah perkembangan mikroorganisme lain yang menyertainya..

Bakteri Escherichia coli adalah coliform fecal utama yang hadir sebagai kontaminan dalam sumber air dan makanan, menyebabkan efek pencernaan yang penting.

Perlu dicatat bahwa ada banyak serotipe Escherchia coli; di antara mereka kita dapat menyebutkan enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroaggregative (EAEC).

Ini berarti memiliki kapasitas untuk memungkinkan pengembangan mereka semua, tetapi tanpa dapat membedakan di antara mereka. Untuk melakukan ini, tes tambahan harus dilakukan.

Studi mikrobiologis air dan makanan dengan jumlah yang paling memungkinkan (NMP) untuk pencarian coliform total dan fecal adalah protokol yang disesuaikan dengan beberapa fase; fase dugaan, fase konfirmasi dan fase penyelesaian. EC broth digunakan dalam fase konfirmasi.

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Kaldu EC
    • 1.2 kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin
  • 2 Persiapan
    • 2.1 kaldu EC
    • 2.2 kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin
  • 3 Gunakan
    • 3.1 Analisis coliform total dan fecal
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Rekomendasi
  • 6 Referensi

Yayasan

EC Broth

Media EC didasarkan pada penyediaan unsur-unsur nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan optimal coliform total dan fecal, di mana bakteri dimasukkan Escherichia coli.

Unsur-unsur nutrisi ini disediakan oleh triptein, menjadi sumber peptida dan asam amino yang sangat baik. Selain itu, ia juga mengandung laktosa, karbohidrat terfermentasi yang menyediakan energi dan memungkinkan untuk menunjukkan apakah bakteri menghasilkan gas.

Di sisi lain, media mengandung garam empedu yang memberikan karakter selektif, karena menghambat pertumbuhan mikroorganisme Gram-positif yang mungkin ada dalam sampel..

Demikian juga, dipotassium fosfat dan monopotassium fosfat bertindak sebagai sistem keseimbangan pH. Sistem ini diperlukan, karena laktosa yang terkandung dalam kaldu cenderung mengasamkan medium ketika difermentasi oleh mikroorganisme, tetapi ini dikompensasi oleh garam fosfat..

Oleh karena itu, unsur-unsur ini sangat penting, karena keasaman yang tidak terkendali dapat mempengaruhi perkembangan mikroorganisme yang diinginkan.

Untuk bagiannya, natrium klorida menstabilkan medium secara osmotik, sementara air adalah pelarut zat terlarut yang ada dan memberikan konsistensi cairan ke media.

Kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin

Okrend dan Rose menciptakan beragam kaldu EC, yang disebut kaldu EC yang dimodifikasi dengan novobiocin. Modifikasi terdiri dari pengurangan konsentrasi garam empedu dan penambahan 20 mg / dl novobiocin.

Modifikasi ini mendukung pemulihan strain Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Serotipe bakteri ini menyebabkan kolitis hemoragik parah yang dapat menyebabkan sindrom uremik hemolitik (HUS); yang pada gilirannya dapat menghasilkan gagal ginjal akut, dengan angka kematian yang tinggi yang dapat mencapai hingga 50% pada lansia.

Karena morbiditas dan mortalitas yang disebabkan setiap tahun oleh bakteri ini karena konsumsi makanan yang terkontaminasi, Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA) secara luas merekomendasikan penggunaan cara ini..

Persiapan

EC Broth

Timbang 37,4 gr medium kering dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran harus dibiarkan diam selama 5 menit. Selanjutnya, dalam sumber panas, larutkan sering.

Setelah larut, didistribusikan dalam tabung reaksi yang sebelumnya dikondisikan dengan tabung Durham di dalam. Sterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

PH medium harus 6,9 ± 0,2. Warna media dehidrasi adalah krem ​​dan disiapkan berwarna kuning muda.

Anggur disimpan dalam lemari es sampai digunakan. Pada saat digunakan, kaldu harus pada suhu kamar.

Di sisi lain, kaldu EC juga dapat disiapkan dengan konsentrasi ganda.

Kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin

Timbang 36,7 gr medium kering dan larutkan dalam 1 liter air. Sisa persiapannya sama dengan yang dijelaskan di atas.

Gunakan

Analisis coliform total dan fecal

EC broth sangat ideal untuk tahap konfirmasi studi coliforms dengan metode NMP, baik dalam sampel air, seperti pada produk farmasi dan makanan..

Kaldu produksi keruh dan gas yang malas yang diperoleh dalam fase dugaan harus ditanam kembali dalam 2% empedu hijau terang dan kaldu EC.

Untuk coliform total, kaldu EC diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk koliform tinja mereka diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 44 ° C.

Dalam kedua kasus itu ditafsirkan dengan cara berikut: tabung keruh dengan produksi gas dianggap positif. Jika tidak ada produksi gas dalam 24 jam, inkubasi dilanjutkan hingga 48 jam.

Kaldu EC positif diteruskan ke fase konfirmasi lengkap, yang terdiri dari pemasangan kembali di media selektif seperti agar Mac Conkey, agar EMB atau agar Endo..

Jika kaldu yang digunakan EC dimodifikasi dengan novobiocin, tabung positif direkomendasikan untuk ditanam kembali pada agar Mac Conkey dengan sorbitol.

Kontrol kualitas

Kontrol kualitas harus dilakukan pada setiap batch media yang disiapkan. Pertama, sterilitas medium harus dievaluasi. Dalam pengertian ini, satu atau dua kaldu diinkubasi tanpa diinokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C. Hasil yang diharapkan adalah kaldu transparan, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui harus dievaluasi, dimana bakteri berikut dapat digunakan: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kasus pengembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, mengamati kaldu keruh dengan produksi gas E. coli dan tanpa gas untuk Salmonella.

Strain lain yang dapat dimasukkan dalam kontrol adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini harus dihambat total.

Rekomendasi

-Penempatan tabung Durham sangat penting untuk studi coliform.

-Sebarkan media dalam tabung reaksi sebelum sterilisasi, tidak pernah setelahnya.

-Jangan gunakan jika media memiliki persiapan lebih dari 3 bulan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan karakteristik media yang biasa.

Referensi

  1. Laboratorium Britania. EC Medium. 2015. Tersedia di: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorrhagic. Pusat ketahanan pangan dan kesehatan masyarakat. 2010. Tersedia di: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. EC sedang. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen Medium EC dimodifikasi dengan novobiocin. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Deteksi Castillo M., isolasi dan karakterisasi Escherichia coli penghasil toksin Shiga dari daging sapi segar dari toko daging di Concepción, provinsi Tucumán. Rev Microgol oleh Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tersedia di: www.scielo.org.