Pondasi setengah SIM, persiapan dan penggunaan



itu setengah SIM Ini adalah agar semi-padat dan diferensial, yang dirancang khusus untuk membantu identifikasi beberapa bakteri, terutama dari famili Enterobacteriaceae. Ini terdiri dari triptein, pepton, besi sulfat, amonium sulfat, natrium tiosulfat dan agar.

Media ini memungkinkan pelaksanaan tiga tes penting: produksi hidrogen sulfida (H2S), pembentukan dan motilitas indole, maka akronim SIM. Karena kegunaannya yang luar biasa, ia tidak dapat kurang di laboratorium bakteriologi.

Tidak seperti media lain, ini harus semi-solid sehingga kapasitas pergerakan beberapa bakteri dapat dideteksi. Dalam pengertian ini, tes ini bekerja sangat baik untuk Enterobacteriaceae, tetapi tidak dalam basil Gram-negatif, non-fermentasi, di mana lebih disukai untuk menggunakan metode lain, seperti, misalnya, pending drop.

Media SIM memungkinkan untuk membedakan sifat spesifik tertentu yang mengkarakterisasi beberapa bakteri dalam kaitannya dengan yang lain. Sebagai contoh Escherichia coli dibedakan dengan menjadi H2S (-), Indole (+) dan motility (+), sementara Proteus mirabilis ini H2S (+), indole (-), motility (+).

Indeks

  • 1 Yayasan
    • 1.1 Sumber daya
    • 1.2 Produksi hidrogen sulfida
    • 1.3 Pembentukan indole
    • 1.4 Motilitas
  • 2 Persiapan
    • 2.1 Setengah SIM
    • 2.2 reagen Kovac
    • 2.3 Pereaksi Erlich
  • 3 Penggunaan
    • 3.1 Diunggulkan
  • 4 Kontrol kualitas
  • 5 Keterbatasan
  • 6 Referensi

Yayasan

Ini adalah media kultur yang dianggap diferensial, karena penggunaannya berhasil membedakan antara mikroorganisme yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida dari yang tidak; juga menyoroti mereka yang membentuk indol dari triptofan dari mereka yang tidak membentuknya, dan akhirnya membedakan motil dari bakteri imobil.

Sumber daya

Sebagai media kultur apa pun, ia memiliki unsur-unsur yang menyediakan nutrisi yang diperlukan sehingga mikroorganisme yang tidak menuntut dapat berkembang. Elemen-elemen ini diwakili oleh pepton dan tripteína.

Perkembangan mikroorganisme di lingkungan sangat penting untuk dapat mengamati ada atau tidaknya karakteristik yang dievaluasi oleh media ini.

Produksi hidrogen sulfida

Huruf S dari akronim SIM mengacu pada produksi hidrogen sulfida (H2S). Bakteri yang mampu membentuk hidrogen sulfida akan mengambil sulfur natrium tiosulfat.

Setelah huruf H terbentuk2S - gas tidak berwarna - ini bereaksi dengan garam besi hadir dalam medium, membentuk sulfida besi, terlihat jelas (endapan hitam). Bakteri yang tidak membentuk H2S, tinggalkan bagian tengah warna asli (krem).

Kehadiran endapan hitam dapat menghambat interpretasi motilitas. Namun, diketahui bahwa sebagian besar enterobacteria penghasil H2S adalah motilitas positif, seperti Salmonella, Proteus dan Citrobacter. Selain itu, endapan hitam yang menutupi hampir seluruh media, menunjukkan motilitas positif.

Pelatihan indole

Huruf kedua dari SIM akronim adalah "I", yang mewakili pembentukan indole.

Dalam pengertian ini, tripteína, selain sebagai sumber nutrisi, memenuhi fungsi mendasar lainnya. Pepton ini kaya akan asam amino yang disebut triptofan, oleh karena itu, dapat menunjukkan bakteri yang memproduksi triptofanase.

Enzim ini bertanggung jawab untuk memotong asam amino triptofan, dengan konsekuensi pembentukan indol (zat tidak berwarna), asam piruvat dan amonium..

Itulah sebabnya, untuk menunjukkan reaksi ini, perlu menambahkan zat yang mengungkapkan (pereaksi Ehrlich atau pereaksi Kovac). Salah satu dari mereka bereaksi dengan indole, membentuk zat fuchsia merah berbentuk cincin di permukaan agar-agar. Jika cincin fuchsia muncul, tes indole ditafsirkan positif.

Bakteri yang tidak memiliki enzim ini, tidak akan membentuk cincin dan ditafsirkan sebagai tes indole negatif.

Penting untuk menunjukkan bahwa tes indole harus menjadi yang terakhir ditafsirkan, karena begitu reagen ditambahkan, media menjadi keruh sehingga sulit untuk memvisualisasikan motilitas..

Motilitas

Akhirnya huruf "M" dari kata SIM berarti motilitas. Untuk dapat mengevaluasi motilitas, media ini semi-solid secara strategis, karena karakteristik ini sangat penting untuk dapat mengamati apakah ada atau tidak pergerakan bakteri. Bakteri yang memiliki flagela adalah mereka yang memberikan tes positif ini.

Tes positif akan terbukti ketika kekeruhan diamati, baik di inokulum awal, dan di sekitarnya. Sementara, bakteri non-seluler hanya berkembang di jalur inokulum awal.

Persiapan

Setengah SIM

Timbang 30 g media kering dan larutkan dalam satu liter air suling. Campuran dibiarkan selama 5 menit dan kemudian dipanaskan hingga mendidih, aduk terus sampai benar-benar larut..

Sebarkan campuran dalam tabung reaksi dengan tutup kapas dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Lepaskan rak tabung dari autoklaf dan biarkan memadat dalam posisi tegak, sehingga medianya berbentuk balok..

Untuk penyimpanan, disimpan di lemari es sampai digunakan. Media yang disiapkan harus memiliki pH akhir 7,3 ± 0,2.

Pada saat menginokulasi media, harus pada suhu kamar. Warna media adalah krem.

Reagen Kovac

Ukur 150 ml amil atau isoamil atau butil alkohol. (Gunakan salah satu dari tiga yang disebutkan).

Larutkan 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde. Kemudian, perlahan tambahkan 50 ml asam klorida pekat.

Pereaksi yang siap digunakan tidak berwarna atau kuning muda. Itu harus disimpan dalam botol kuning dan disimpan di lemari es. Jangan gunakan jika warnanya coklat tua; itu menunjukkan bahwa itu rusak. Pereaksi ini lebih disukai ketika berhadapan dengan enterobacteria.

Reagen Erlich

Timbang 2 g p-dimethylaminobenzaldehyde dan larut dalam 190 ml absolut etil alkohol dan campur perlahan dengan 40 ml asam klorida pekat. Jaga reagen Kovac dengan cara yang sama. Pereaksi Ehrlich lebih banyak digunakan untuk bakteri non-fermentasi dan anaerob.

Penggunaan

Media SIM sangat digunakan di laboratorium bakteriologi. Ini memiliki keuntungan bahwa dalam tabung yang sama tiga karakteristik penting dapat diamati dalam identifikasi Enterobacteriaceae.

Ditaburkan

Cara yang benar untuk menabur media ini adalah dengan menggunakan jarum, yang dengannya sebagian koloni murni yang akan dipelajari diambil dan dimasukkan ke tengah media secara vertikal. Dorongan tunggal harus dilakukan. Tusukan tidak harus mencapai bagian bawah tabung, hal yang benar adalah untuk menutupi hanya dua pertiga dari kedalaman.

Tidak disarankan untuk mengulang inokulum, karena hal ini dapat menyebabkan interpretasi yang salah tentang motilitas positif. Media yang diinokulasi diinkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 jam.

Disimpulkan waktu diamati apakah ada atau tidak produksi H2S dan motilitas dibaca. Akhirnya indole terungkap, menambahkan 3 sampai 4 tetes Ehrlich atau reagen Kovac, itu dicampur dengan lembut dan ditafsirkan.

Kontrol kualitas

Sebagai kontrol sterilitas, satu atau dua tabung diinkubasi tanpa inokulasi dalam oven pada suhu 37 ° C selama 24 jam. Diharapkan setelah waktu ini tidak akan ada pertumbuhan atau perubahan warna.

Sebagai kontrol kualitas, strain yang dikenal tersertifikasi dapat digunakan, seperti: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Hasil yang diharapkan adalah: Escherichia coli H2S motilitas negatif, indole, dan positif, Enterobacter aerogenes hanya motilitas positif, Salmonella typhimurium H2S dan motilitas positif, dengan indole negatif. Proteus vulgaris semua positif, sementara Klebsiella pneumoniae dan Shigella sonnei semua negatif.

Keterbatasan

-Beberapa strain Morganella morganii, di antara strain lain dapat menghasilkan pigmen kecoklatan di media ini karena produksi melanin, ini tidak boleh bingung dengan endapan ferrous sulfide. Pada profesional yang tidak berpengalaman, situasi ini dapat menghasilkan hasil positif palsu dalam penafsiran tes H2S.

-Bakteri aerobik yang ketat hanya akan tumbuh di permukaan tabung, yang membuatnya sulit untuk menafsirkan motilitas.

Referensi

  1. Laboratorium BD BBL SIM Medium. 2008. Tersedia di: bd.com
  2. Laboratorium Neogen SIM Medium. Tersedia di: foodafety
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tersedia di: http://f-soria.es
  4. Laboratorium Brizuela-Lab SIM Medium. Tersedia di: .brizuela-lab.com
  5. Laboratorium Britania. SIM Medium. 2015. Tersedia di: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana S.A. Argentina.